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Small RNA Cloning Kit酶试剂盒Takara Clontech

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Small RNA Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR065 Small RNA Cloning Kit 10 Rxns ￥3,655 Small RNA Cloning Kit Small RNA Cloning Kit Small RNA Cloning Kit
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Small RNA Cloning Kit  
 
 
■ 制品内容 (10 次量)
□ Package1 (-20℃保存)  
RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl
10X BAP Buffer 200 μl
Alkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl) 20 μl
0.1%BSA 60 μl
3’Adaptor*1*2 10 μl
T4 RNA Ligation Buffer 600 μl
T4 RNA Ligase (40 U/μl) 20 μl
5X T4 PNK Buffer 100 μl
T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl) 10 μl
5’Adaptor*1 10 μl
5X RT Buffer 40 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 90 μl
PCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)*1*3 20 μl
RTase (RNaseH free) (200 U/μl) 10 μl
2X PCR Buffer 250 μl
PCR Primer F (50 pmol/μl)*1 10 μl
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 10 μl
Control RNA (5 pmol/μl)*4 10 μl
□ Package2 (4℃保存)  
3M Sodium Acetate (pH 5.2) 200 μl
Dr.GenTLE Precipitation Carrier*5 80 μl
2X B/W Buffer 2.7 ml
Magnosphere™ MS300/Streptavidin 100 μl
RNase free dH2O 10 ml
 
*1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都带有Sse8387Ⅰ酶切位点，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR产物可以与Pst I酶切的载体进行连接克隆。本试剂盒中不备有限制酶和克隆用载体，请另外准备。
*2 3’Adaptor已用生物素标记。
*3 PCR用的Reverse Primer，也可以作为反转录引物使用。
*4 Control RNA是一条21mer、5’端磷酸化的RNA。
*5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。
 
 
■ 制品说明
近几年的研究表明，在细胞内发现的RNA中有许多是非编码RNA，它们有着重要的功能，这些RNA被称为功能性RNA，其中倍受关注的是18-26 个碱基的低分子RNA，这些低分子RNA的功能有：
① mRNA水平抑制基因表达。
② 翻译水平抑制基因表达。
克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA与mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆时，需在小RNA的5’端和3’端分别加上RNA接头或者RNA/DNA杂合形式的接头，经RT-PCR后进行PCR。
本试剂盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。
试剂盒通过简单的磁珠吸附操作即可纯化小RNA反转录得到的cDNA，省去了在接头连接之后切胶回收等复杂操作步骤。扩增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接头中带有的酶切位点进行克隆。
使用本试剂盒对小RNA (Small RNA) 进行克隆时的操作流程见图1。起始的Small RNA是由总RNA 经过电泳及切胶回收得到的。详细步骤如下：
1. 将Small RNA进行BAP处理，5’端去磷酸化。
2. 将带有生物素标记的RNA/DNA杂合形式的接头与BAP处理后的Small RNA的3’端进行连接。
3. 用标记Streptoavidin的磁珠，回收带有生物素标记接头的Small RNA，然后进行5’端磷酸化反应。
4. 将5’端连接上RNA/DNA嵌合的接头后，使用RT Primer和反转录酶进行反转录反应。
5. 从磁珠上回收合成的cDNA后，进行PCR反应。
6. PCR片段克隆。
 
■ 各种引物及Control RNA的碱基序列
名 称 切 点 酶 例
PCR-R & RT-Primer
    5’-GTCTCTAG CCTGCAGG ATCGATG-3’
反转录反应及PCR反应的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。
PCR-Primer F
5’-AAAGAT CCTGCAGG TGCGTCA-3’
PCR反应的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。
Control RNA     5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’ 用于Control反应。
    
■ small RNA克隆流程图
Small RNA Cloning Kit
 
 

pBackZero-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara Clontech

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pBackZero-T Vector Cloning Kit
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Takara 3275 pBackZero-T Vector Cloning Kit 20 Rxns ￥631 pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit
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pBackZero-T Vector Cloning Kit
pBackZero-T Vector Cloning Kit  
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
 
■ 制品内容
pBackZero-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert 4 (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
Solution I*1 75 μl × 2 支
Primer Bla M1 (20 μM)*2 50 μl × 1 支
Primer Bla RV (20 μM)*2 50 μl × 1 支
   
*1：使用时请于冰中融解。
*2：Primer Bla M1：5’- AAG CCC TCC CGT ATC GTA GTT ATC -3’ (24 nt)
    Primer Bla RV：5’- ACT CAC GTT AAG GGA TTT TGG TCA -3’ (24 nt)
 
■ 制品说明
pBackZero-T Vector是一种阳性克隆率非常高而背景很低的PCR产物克隆 (TA Cloning) 专用载体。本载体是由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的LacZ基因及多克隆位点，并对β-lactamase (bla) 基因进行了特别的改造，再通过酶切反应，最后在两侧的3’端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
本载体对β-lactamase基因进行了特别的改造，使用时需在待插入的DNA片段的上、下游Primer的5’端加上TTTAA 5个碱基。如果需要进行定向克隆，只需在一条引物的5’端加上TTTAA 5个碱基，这样可以保障β-lactamase基因具有活性，菌落可以在Amp抗性平板上生长。而那些由于载体自连、插入非目的片段等原因造成的假阳性克隆不具有β-lactamase基因活性，不能在Amp抗性平板 (工作浓度100 μg/ml) 上生长。因此使用这种载体在Amp抗性平板上生长的菌落基本都是阳性克隆，背景降至很低，保证了非常高的阳性克隆率。使用本试剂盒中的Control Insert 4时，阳性克隆率可以达到99%以上。此外，本载体也无需使用IPTG/X-Gal进行蓝白筛选。值得注意的是由于本载体上消除了多克隆酶切位点，当PCR产物使用本载体进行克隆时，将无法使用载体上的限制酶切位点，需要事先在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。本制品中的高效连接液Solution I可以在短时间内(约30分钟)完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert 4 (500 bp) 可以用于Control反应。
 
   
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert 4经克隆后，有99%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 低背景需求的克隆。
3. 对克隆后的DNA进行测序。
4. 定向克隆。
 
■ pBackZero-T Vector的结构
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
■ 使用事项
1. PCR片段扩增用的2条Primer除了含有扩增目的片段用的序列外，还要在其5’端均加入TTTAA 5个碱基。当进行定向克隆时，可以选择其中1条Primer加入TTTAA 5个碱基。
2. Solution I请于冰中融解。
3. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR产物)建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA(甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率 。
4. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No. : 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
6. 本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
7. 由于本制品是利用β-lactamase缺失进行筛选，所以对筛选平板使用的氨苄青霉素 (Amp) 的质量要求较高，请使用高品质的氨苄青霉素 (Amp) ，工作浓度为100 μg/ml。不要使用配制时间过长的氨苄青霉素 (Amp) 或平板。
 
 

In-Fusion HD Cloning Plus酶试剂盒Takara Clontech

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In-Fusion HD Cloning Plus
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 638909 In-Fusion HD Cloning Plus 10 Rxns ￥3,788 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638910 In-Fusion HD Cloning Plus 50 Rxns ￥15,839 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
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In-Fusion HD Cloning Plus
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In-Fusion HD Cloning Plus
 
 
In-Fusion克隆选择
制品名称 Code No. 除In-Fusion酶外，试剂盒中附带的制品
纯化用试剂 纯化用Column 高效感受态 高保真PCR酶
Cloning Enhancer NucleoSpin Stellar Competent Cell CloneAmp HiFi PCR Premix
In-Fusion® HD Cloning Kit 639648/49/50 - - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer 639633/34/35 √ - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/NucleoSpin 639639/40/41 - √ - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Competent Cells 639642/43/44 - - √ -
In-Fusion® HD Cloning Plus 6338909/10/11/20 - √ √ √
In-Fusion® HD Cloning Plus CE 638916/17/18/19 √ - √ √
In-Fusion® HD Cloning System 639645/46/47/92 - √ √ -
In-Fusion® HD Cloning System CE 639636/37/38/93 √ - √ -
 
In-Fusion PCR Cloning Kits可以在15分钟反应内，将任一PCR片段或多个片段方向性地、无缝地克隆到任何线性载体上。无需对PCR片段进行其他的处理，例如限制酶切、连接、磷酸化或末端平滑化。 In-Fusion HD Cloning kits的效率可达95%。
 
In-Fusion PCR Cloning 是如何作用的
利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列，In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。
 
In-Fusion HD Cloning Plus组分
所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control实验的试剂。 In-Fusion HD Cloning Plus kits 还包括：
·CloneAmp HiFi High Fidelity PCR Premix
  CloneAmp HiFi PCR Premix 是方便的2× master mix，实现准确、高效、快速的DNA扩增。Premix
  中包含了dNTP和优化的buffer，PCR反应可以设置为快速反应，更便利地实现成功的克隆。
·Stellar Competent Cells
  Stellar Competent Cells属于E. coli HST08细胞系，具有大于5 × 108 cfu/μg的高转化效率，
  有助于 提高In-Fusion HD Cloning Plus kit的效率。
·Cloning Enhancer 或NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up
  1.Cloning Enhancer (CE) 是易用型的酶premix，消除背景质粒DNA和PCR残留物，在克隆前无需进
  行PCR产物纯化。 In-Fusion HD Cloning Plus CE kits是PCR生成单一产物时的理想选择。
  2.如果PCR生成多于一条带，可以选择NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up用于PCR纯化。
 
■ 点击图片查看相关资料
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In-Fusion HD Cloning Plus酶试剂盒Takara Clontech

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In-Fusion HD Cloning Plus
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 638909 In-Fusion® HD Cloning Plus 10 Rxns ￥3,788 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
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制品名称 Code No. 除In-Fusion酶外，试剂盒中附带的制品
纯化用试剂 纯化用Column 高效感受态 高保真PCR酶
Cloning Enhancer NucleoSpin Stellar Competent Cell CloneAmp HiFi PCR Premix
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In-Fusion PCR Cloning Kits可以在15分钟反应内，将任一PCR片段或多个片段方向性地、无缝地克隆到任何线性载体上。无需对PCR片段进行其他的处理，例如限制酶切、连接、磷酸化或末端平滑化。 In-Fusion HD Cloning kits的效率可达95%。
 
In-Fusion PCR Cloning 是如何作用的
利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列，In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。
 
In-Fusion HD Cloning Plus组分
所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control实验的试剂。 In-Fusion HD Cloning Plus kits 还包括：
·CloneAmp HiFi High Fidelity PCR Premix
  CloneAmp HiFi PCR Premix 是方便的2× master mix，实现准确、高效、快速的DNA扩增。Premix
  中包含了dNTP和优化的buffer，PCR反应可以设置为快速反应，更便利地实现成功的克隆。
·Stellar Competent Cells
  Stellar Competent Cells属于E. coli HST08细胞系，具有大于5 × 108 cfu/μg的高转化效率，
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·Cloning Enhancer 或NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up
  1.Cloning Enhancer (CE) 是易用型的酶premix，消除背景质粒DNA和PCR残留物，在克隆前无需进
  行PCR产物纯化。 In-Fusion HD Cloning Plus CE kits是PCR生成单一产物时的理想选择。
  2.如果PCR生成多于一条带，可以选择NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up用于PCR纯化。
 
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In-Fusion HD Cloning Plus克隆产品选择指南
In-Fusion HD Cloning PlusIn-Fusion克隆FAQ
In-Fusion HD Cloning PlusIn-Fusion克隆Tips
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多片段克隆protocol
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引物设计工具
 
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2分钟了解In-Fusion的操作流程
多才多艺的In-Fusion无缝克隆
2分钟看懂In-Fusion作用机制的与众不同
 
 
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Clontech 639648 In-Fusion® HD Cloning Kit 10 Rxns ￥1,155 In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits
Clontech 639649 In-Fusion® HD Cloning Kit 50 Rxns ￥5,204
￥3,903 		In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits
Clontech 639650 In-Fusion® HD Cloning Kit 100 Rxns ￥9,221
￥6,916 		In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits In-Fusion HD Cloning kits

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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    In-Fusion HD Cloning kits
    In-Fusion HD Cloning kits  
    In-Fusion HD Cloning kits
     
     
    ■ 制品说明
    In-Fusion克隆技术凭借插入的目的DNA片段与载体末端的15个同源碱基序列就可以完成目的基因的定向克隆，操作简单快速。In-Fusion HD采用5×预混合酶试剂，大大缩短了反应时间，让您轻松操作。
    In-Fusion HD Cloning kits
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    ■ 制品特点
    1. 设计随心而动：在任意载体位点插入任意基因片段
    2. 真实的表达：依据15 bp同源序列实现无缝克隆，消除冗余碱基
    3. 不只是简单的克隆：单片段插入，多片段克隆，定点突变
     
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