dmem培养基的配制(GIBCO)文字及视频

 dmem培养基广泛应用于疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养。下面介绍dmem培养基的配制过程。摘自李玲、李雪峰编著的《细胞生物学实验》。

1 制备新鲜三蒸水或Millipore超纯水。 

2 称取所需量的干粉培养基加入约终体积一半的三蒸水中；若配制一个包装的培养液，在将整个包装的干粉倒入三蒸水后需用水洗包装袋内面2次，倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。磁力搅拌或人工搅拌使之完全溶解。 

3 根据包装袋上的要求补加所需量的碳酸氢钠根据实验需要添HEPES5-20mmol/L、谷氨酰胺和其他特殊物质。 

4 加水定容到终体积。 

5 必要时用1 mol/L 盐酸和1 mol/L 氢氧化钠调节pH。 

6 用无菌0.22um滤膜过滤除菌分装于无菌血清瓶中4℃冰箱保存。 配制好的培养液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL链霉素并根据需要加入血清5%-20%。 

附dmem培养基教学视频。

细胞膜蛋白的提取方法

生物侠们，还在实验室奋战吗？还在为科研经费不够发愁吗？今天我就给各位通宵达旦的大侠们带来一个福音。下面就让我替他给你讲讲，抓紧时间啊！

首先你需要一株需要提前膜蛋白的细胞、NP40、氯化钠、Tris-Hcl、SDS、脱氧胆酸钠和PMSF，东西齐全了，就开始配裂解液吧。下面是配方哦！

RIPA Buffer                For 100ml:

150mM NaCl              5ml 3M NaCl

50mM TrisHCl pH8.0   5ml 1M TrisHCl pH8.0

1mM EDTA pH8.0      0.2ml 0.5M EDTA pH8.0

1%NP-40                  5ml   20% NP-40

0.1% SDS                 1ml   10% SDS

0.1% Deoxycholate    100mg Deoxycholate

那东西都齐全了，那么来开始讲步骤吧！

1.收集细胞，将1000转离心收集的（最好低温哦）细胞悬于裂解液中20分钟；

2.就12000离心吧，收集沉淀哦；

3.在加入裂解液；

4.然后超声10-15次，每次2秒，间隔15秒；

5.再12000低温离心，收集上清，开始做实验咯

dab显色液配制四个注意事项

DAB显色液主要和蛋白质的NH2或SH基团结合，形成稳定的nn键或ns键，然后DAB中的显色基团就能显示出颜色，标记到已经暴露的蛋白质上，从而显示我们目标细胞的蛋白质分布及种类等。DAB显色液配置要注意以下事项。

应注意一下几点：

1.DAB一定要新鲜配制（显色前10min配）；

2.用前一定要过滤；

3.DAB浓度不易太高，一般0.05％－0.03%即可，否则会增加背景染色，过氧化氢的量也不易太高，否则也可能增加背景染色，一般0.01％＝0.03％即可；

4.DAB可诱发皮肤癌和膀胱癌，用时要小心，配好的DAB用滤纸过滤，不要污染。

上海金畔生物科技有限公司已提供DAB显色试剂盒成品供应，免除了各位老师和同学手工配置过程，避免伤害。除此上海金畔生物科技有限公司还提供完善售后技术支持。有技术问题可以拨打上海金畔生物科技有限公司技术支持电话4009686088。上海金畔生物科技有限公司将为您提供技术支持。

BSA封闭液原理及注意事项

    5%BSA封闭液(Blocking Buffer)适用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。

BSA封闭液原理：

    封闭的目的是防止免疫试剂的非特异性吸附。封闭一般采用异源性蛋白质或去污剂，常用的有0.2%Tween-20，5%BSA，10%马血清以及5% No-fat milk等，至于选择哪一类封闭液，首先应考虑与检测试剂相适应，如采用葡萄球菌蛋白A（SPA）作用检测试剂，就不能用全血清封闭，其次是尽可能使非特异着色背景浅，封闭液以5%BSA效果较好。

BSA封闭液使用方法：

    本产品为即用型，无需稀释。封闭步骤中加入足够量的 BSA 封闭液充分覆盖载体表面，振荡封闭，封闭 时间依据实验而定，一般室温封闭半小时至 1 小时，然后进行抗体孵育等后续操作。

BSA封闭液注意事项：

    通常在室温封闭 60 分钟即可。对于一些背景非常高的抗体，可以 4℃封闭过夜。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用5%BSA 封闭液封闭后，可以减小后续的一抗或二抗等和载体的非特异性结合，降低背景，增强信噪比，以达 到理想的显色效果。

快速考染的方法

还在为考染的时间长而发愁吗？还在为考染的脱色换液而苦恼吗？今天我给大家介绍一款试剂和一种方法。为你排除烦恼！！

虽然刚刚的话有点广告的意味，但是我说的都是真的哦！！！

普通的考染需要染色1个小时以上，脱色分为脱色液脱色和加热脱色两者，后者的时间明显短于前者。为了快速拿到可靠的结果是我们每一个科研侠的愿望。所以请注意看吧！

快速考染的方法（P1300–Jinpanbio）：

将工作液B和A按照50:1进行混合；

将跑好的PAGE胶进行热洗：加入适量的双蒸水，煮沸后弃去水；

加入适量配好的染液，煮沸后保持一小段时间（30-60秒），然后放在摇床上5-10分钟，弃去染液；

再加入适量的双蒸水，煮沸后，在摇床上摇5分钟，弃去水，并加入新的水。

这时候就可以明显的看到蛋白条带了。

是不是很快？最快约10分钟哦！

那就有人问了，这里染液是两个混合配成的，和普通的考马斯亮蓝染液有区别吗？

我就做简单的回答吧！其实配方是不一样的，但是目的原理都差不多。这个的出现的确会省去很多的时间。