细胞膜蛋白的提取方法-技术文章

细胞膜蛋白的提取方法

生物侠们,还在实验室奋战吗?还在为科研经费不够发愁吗?今天我就给各位通宵达旦的大侠们带来一个福音。下面就让我替他给你讲讲,抓紧时间啊!

首先你需要一株需要提前膜蛋白的细胞、NP40、氯化钠、Tris-Hcl、SDS、脱氧胆酸钠和PMSF,东西齐全了,就开始配裂解液吧。下面是配方哦!

RIPA Buffer                For 100ml:

150mM NaCl              5ml 3M NaCl

50mM TrisHCl pH8.0   5ml 1M TrisHCl pH8.0

1mM EDTA pH8.0      0.2ml 0.5M EDTA pH8.0

1%NP-40                  5ml   20% NP-40

0.1% SDS                 1ml   10% SDS

0.1% Deoxycholate    100mg Deoxycholate

那东西都齐全了,那么来开始讲步骤吧!

1.收集细胞,将1000转离心收集的(最好低温哦)细胞悬于裂解液中20分钟;

2.就12000离心吧,收集沉淀哦;

3.在加入裂解液;

4.然后超声10-15次,每次2秒,间隔15秒;

5.再12000低温离心,收集上清,开始做实验咯

nunc