上海金畔生物科技有限公司Masson三色染色试剂盒的原理及使用方法

Masson 三色染色是结缔组织染色知更鸟最经典的一种方法，是显示组织中纤维的主要方法之一，也是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量容易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构稀松的、渗透性高的组织。Masson三色法染色试剂盒染胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色）；胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色；胞核蓝紫色。

Masson 三色染色原理：

Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色（被亮绿所染），肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染)，这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染，而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小，肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色（GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色），嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。

Masson 三色染色步骤：

1.试剂配制

（1）苏木素染液（见HE染色法）

（2）Masson复合染色液：丽春红(ponceau 2R) 0.7g、酸性品红(acid fuchsin) 0.3g、蒸馏水 99 ml、冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml

（3）亮绿染色液：亮绿(light green) 1g、冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml、蒸馏水 99 ml

（4）1%磷钼酸水溶液?：磷钼酸（phosphomolybdic acid） 1g、蒸馏水加至 100ml

（5）2%苯胺蓝液：苯胺蓝(aniline blue) 2g、冰醋酸(glacial acetic acid) 2ml、蒸馏水加至 100ml

2.染色步骤

10%甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（1）苏木素染液5～10min。

（2）流水稍洗，1%盐酸分化。

（3）流水冲洗数分钟。

（4）Masson复合染色液5～10min。

（5）蒸馏水稍冲洗。

（6）1%磷钨酸液处理约5min。

（7）不用水洗，直接用亮绿染色液（或苯胺蓝液）复染5min。

（8）1%冰醋酸水处理1min。

（9）95%酒精脱水多次。

（10）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.实验结果

胶原纤维呈绿色（用亮绿复染）或蓝色（用苯胺蓝液复染），胞质、肌纤维和红细胞呈红色，胞核呈蓝色。

Masson 三色染色注意事项：

（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。

（2）组织用Bouin氏液固定为佳。如已用10%甲醛液固定，切片可脱蜡至水后，再放入Bouin氏液作用一晚或37℃温箱内1～2h，然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

（3）如没有丽春红染料，可把酸性品红加至1克来配制。

（4）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。

（5）组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

（6）用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品。Masson三色染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其染色稳定、分化时间短、色彩清楚鲜艳，适用于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色。详细信息可下载产品说明书。

胞嘧啶的性质及与胸腺嘧啶的区别

胞嘧啶是核酸(DNA和RNA)中的主要碱基组成成分之一。胞嘧啶可由二巯基脲嘧啶、浓氨水和氯乙酸为原料合成制得。用作药物中间体。

胞嘧啶的性质：

CAS号： 71-30-7

分子式： C4H5N3O

分子量： 111.10

纯度： ≥98.0%

MDL号： MFCD00006034

Beilstein号： 2637

EC号： 200-749-5

白色片状结晶。100℃失水，300℃时成棕色，320～325℃分解。1g产品能溶于130ml水，微溶于乙醇，不溶于乙醚。pH2时，最大吸收波长276nm，摩尔吸光系数10000，最小吸收波长238nm，吸光度比值A250/A260=0.48、A280/A260=1.53、A290/A260=0.78。有刺激性。

胞嘧啶与胸腺嘧啶的区别：

1.胞嘧啶：化学名4-氨基-2-羰基嘧啶，。简写为C。；胸腺嘧啶：化学名2，4-二羟基(酮基)-5-甲基嘧啶，简写为T。

2.胞嘧啶存在于DNA和RNA中。在植物DNA中，除胞嘧啶外，还有少量的5-甲基胞嘧啶。在DNA的双股螺旋中，一股链上的胞嘧啶与另一股链上的鸟嘌呤配对，分子间形成三个氢键。这种碱基互补对之间的氢键是DNA双螺旋结构稳定性的重要作用力之一；胸腺嘧啶是自胸腺中分离得到的胸腺嘧啶是脱氧核糖核酸中的碱基之一。可与脱氧核糖结合形成胸腺嘧啶的脱氧核苷，其5-位甲基上的氢为氟取代后的产物称为三氟代胸腺嘧啶脱氧核苷，用做抗核酸代谢类抗肿瘤药物。紫外线照射可使DNA分子中同一条链两相邻的胸腺嘧啶碱基之间形成二聚体，影响了DNA的双螺旋结构，使其复制和转录功能均受到阻碍。

MES缓冲液配制及保存

 MES缓冲液中文名称2-(N-吗啡啉)乙磺酸。主要用于生物缓冲剂，为白色晶体粉末。CAS登录号：145224-94-8。MES缓冲液配制简单方便，下面是具体配制操作。

配制：

配制MES缓冲液时，要用NaOH调pH到目标pH值（pH5.5 – 6.7）。MES易溶于水，呈无色透明状。未调pH之前，MES溶液的pH位于2.5到5之间。0℃时，饱和MES溶液的浓度约为0.65M。

保存：

MES溶液在2-8℃可以保存数月之久。建议采用孔径0.2微米滤膜过滤除菌。（含硫酸根的物质都不易高温灭菌）MES经高温灭菌之后，会显淡黄色，至于该淡黄色的降解物是什么还不清楚，不过pH不会发生明显改变。

上海金畔生物科技有限公司是专业生化试剂供应商，提供MES缓冲液现货发售，欢迎订购。

Pfu DNA聚合酶使用方法

产品描述：Pfu DNA聚合酶是pyrococcus furiosis 菌中的热稳定性聚合酶，在70～80℃时，镁离子存在的情况下可催化核苷酸沿着5’→3’的方向发生聚合反应，催化DNA的合成。该酶分子量约为90KD。与Taq DNA聚合酶不同，Pfu DNA聚合酶具有3’ →5’外切酶活性，即具有校正功能。建议需要高度保真性的PCR扩增反应和引物延伸中使用Pfu DNA聚合酶。使用Pfu DNA聚合酶的PCR产物是平末端。

来源：表达Pfu DNA聚合酶的大肠杆菌。

酶储存缓冲液：50mMTris-HCl，pH 8.2；0.1mM EDTA；1mM DTT；0.1% Nonidet P40；0.1% Tween 20；50% 甘油。

单位定义：在74℃条件下，30分钟内催化10 nmmoldNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需要的酶量为一个单位。

Pfu DNA聚合酶的用途：

1）常规PCR反应中的DNA高保真体外扩增；

2）基因定点突变和拼接。

Pfu DNA聚合酶的注意事项：

1、酶浓度：建议在50ml的体系中使用1.25个单位的Pfu DNA聚合酶，因为酶存在3’-5’外切酶活性，高浓度的酶可能会增加降解引物的可能性。最好在加完dNTP后再添加Pfu DNA聚合酶。并在有冰浴的条件下混合PCR反应中的各种成分。

2、延伸时间：Pfu DNA聚合酶的延伸速率低于Taq DNA聚合酶，大约为一分钟600个碱基（Taq DNA聚合酶大约为一分钟2000个碱基），因此建议扩增1Kb的DNA用两分钟的延伸时间。对于大多数的反应而言，25～35个扩增循环就足够了。

保存：-20℃保存至少一年。

转铁蛋白的概念及作用

转铁蛋白是血浆中主要的含铁蛋白质，转铁蛋白分子量约7.7万，为单链糖蛋白，含糖量约6%。

转铁蛋白的概念：

铁蛋白又名运铁蛋白（transferrin，TFR，siderophilin），负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。

血浆中转铁蛋白水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。在缺铁性的低血色素贫血中转铁蛋白的水平增高（由于其合成增加），但其铁的饱和度很低（正常值在30%-38%）。相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍（如再生障碍性贫血），则血浆中TRF正常或低下，但铁的饱和度增高。在铁负荷过量时，TRF水平正常，但饱和度可超过50%，甚至达90%。

转铁蛋白是一类广泛存在于脊椎动物体液及其细胞中的Ⅱ类跨膜糖蛋白家族，主要有血清运铁蛋白、卵运铁蛋白和乳转铁蛋白3种类型，不同种类的转铁蛋白有不同的物理、化学和免疫特性，但均由两个三价铁离子结合位点。这类物质大量存在于人血管中，是体液中不可缺少的成分，不仅参与铁的运输与代谢，参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节，还能调节铁离子平衡和能量平衡，更具有抗菌杀菌的保护功能。

转铁蛋白的作用：

转铁蛋白以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。转铁蛋白分子量约7.7万，为单链糖蛋白，医学|教育网搜集整理含糖量约6%.TRF可逆地结合多价离子，包括铁、铜、锌、钴等。每一分子TRF可结合两个三价铁原子。TRF主要由肝细胞合成，半寿期为7天。血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，经铁有效治疗后恢复到正常水平。