上海金畔生物科技有限公司Masson三色染色试剂盒的原理及使用方法

Masson 三色染色是结缔组织染色知更鸟最经典的一种方法，是显示组织中纤维的主要方法之一，也是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量容易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构稀松的、渗透性高的组织。Masson三色法染色试剂盒染胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色）；胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色；胞核蓝紫色。

Masson 三色染色原理：

Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色（被亮绿所染），肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染)，这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染，而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小，肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色（GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色），嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。

Masson 三色染色步骤：

1.试剂配制

（1）苏木素染液（见HE染色法）

（2）Masson复合染色液：丽春红(ponceau 2R) 0.7g、酸性品红(acid fuchsin) 0.3g、蒸馏水 99 ml、冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml

（3）亮绿染色液：亮绿(light green) 1g、冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml、蒸馏水 99 ml

（4）1%磷钼酸水溶液?：磷钼酸（phosphomolybdic acid） 1g、蒸馏水加至 100ml

（5）2%苯胺蓝液：苯胺蓝(aniline blue) 2g、冰醋酸(glacial acetic acid) 2ml、蒸馏水加至 100ml

2.染色步骤

10%甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（1）苏木素染液5～10min。

（2）流水稍洗，1%盐酸分化。

（3）流水冲洗数分钟。

（4）Masson复合染色液5～10min。

（5）蒸馏水稍冲洗。

（6）1%磷钨酸液处理约5min。

（7）不用水洗，直接用亮绿染色液（或苯胺蓝液）复染5min。

（8）1%冰醋酸水处理1min。

（9）95%酒精脱水多次。

（10）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.实验结果

胶原纤维呈绿色（用亮绿复染）或蓝色（用苯胺蓝液复染），胞质、肌纤维和红细胞呈红色，胞核呈蓝色。

Masson 三色染色注意事项：

（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。

（2）组织用Bouin氏液固定为佳。如已用10%甲醛液固定，切片可脱蜡至水后，再放入Bouin氏液作用一晚或37℃温箱内1～2h，然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

（3）如没有丽春红染料，可把酸性品红加至1克来配制。

（4）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。

（5）组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

（6）用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品。Masson三色染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其染色稳定、分化时间短、色彩清楚鲜艳，适用于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色。详细信息可下载产品说明书。