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| Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | MK400 | Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System | 2,500 次 | ￥3,405 |  |
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| ■ 制品内容 | |||||||||||||
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| ■ 制品说明 | |||||||||||||
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上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
特点：
● 享有显色底物WST专利
● 用于L-Glutamate的定量
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测
NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针
试剂盒内含
产品概述
谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。
Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。
原理
本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。
操作步骤
只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。
实验例
标准曲线的实验例：
样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。
谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：
将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。
结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。
铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:
据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。
Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：
将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。
结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。
<使用产品>
· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）
· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）
· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）
· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）
<实验条件>
细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 药物处理时间：48 h
参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.
常见问题Q&A
| Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？ |
| A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。
100 tests 样品数量(n=3) 24个样品(参照下图) 谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)
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| Q2：配制后的Working solution可以保存多久？ |
| A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。
※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。 |
| Q3：是否可以定量D-Glutamate？ |
| A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。 |
| Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？ |
| A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。 |
| Q5：待测样品可以保存吗？ |
| A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。
细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。 |
| Q6：为什么我的样品孔没有显色？ |
| A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。 |
| Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？ |
| A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)
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参考文献
1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.
2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.
3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.
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特点：
● 细胞上清液和细胞样品均适用
● 操作简便
● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸
● 试剂稳定性高
● 享有显色底物WST专利
产品解说
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测
试剂盒内含
概述
乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物，也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明，乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。
Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。
WST®：WST是日本同仁化学研究所的注册商标
原理
本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。
另外，试剂盒中含有乳酸标准液，可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。
特点
特点1：操作简单，只需要加入试剂
只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂，培养即可。
特点2：试剂稳定性高
乳酸标准曲线
可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。
当乳酸浓度在1 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。
实验例
2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用
1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
2、去除上清液后，在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。
3、在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
4、培养后，吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中，并用超纯水稀释8倍制备样品溶液，然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。
5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。
6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。
7、在每孔中加入80 µl工作液。
8、在37℃培养箱中培养30 min。
9、用酶标仪测定450 nm的吸光度，并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。
2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用，随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加，乳酸浓度逐渐减少
葡萄糖和乳酸的测定例
用葡萄糖测定试剂盒（货号：G264）和乳酸测定试剂盒检测（货号：L256）:检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。
■实验条件
细胞：Jurkat细胞（5×105细胞）
药物：Phloretin（终浓度：100 µmol/l）
培养时间：过夜培养
■结果
Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取，减少了葡萄糖的消耗，增加了培养基中葡萄糖的量，并减少了乳酸的量。
常见问题Q&A
| Q：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸吗？ |
| A：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸。 但是在含有血清的情况下，由于背景上升，需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。 【参考数据】 含和不含10％FBS的吸光度比较
<结果> |
| Q：如何检测细胞内乳酸含量？ |
| （1）用微量管收集1×105的细胞*1。
（2）以300×g离心2 min后去除上清液。 （3）加入300 μl的PBS，用移液器吹打使其重悬，再以300×g离心2 min后去除上清液。 （5）以8000×g离心5 min，收集上清液。 *1、样品为HeLa细胞时，为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量，需要1×105的细胞甚至更多。 *3、内源性乳酸脱氢酶（LDH）会导致背景增高，因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶 （LDH）。 |
| Q：配制后的Working Solution稳定性如何，可以保存多久？ |
| A：Working Solution需要现配现用。 光会影响Working Solution的稳定性，所以配制后请用铝箔纸包裹。 配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。 （Working Solution遇到光，溶液的颜色会由红色变为橙色，背景会升高。） |
| Q：为什么我的样品孔没有显色？ |
| A：样品中的乳酸浓度可能低于检测限（0.02 mmol/l）。 乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测，因此请考虑其他方法，如LC-MS。 如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。 请降低稀释比例，从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。 |
| Q：是否可以检测含有还原性物质的样品？ |
| A：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量乳酸浓度。 实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）， 并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。 |
| Q：该试剂盒可以定量D-Lactate吗？ |
| A：该试剂盒是用于L-Lactate的定量，不能定量D-Lactate。 |
| Q：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？ |
| A：也可以使用490 nm的滤光片， 但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。 |
| Q：一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
| A：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)
96孔板排列示意图（n=3） |
参考文献
| 编号 | 文献名 | 年分 | IF |
| 1 | Hypoxia-induced exosomal circPDK1 promotes pancreatic cancer glycolysis via c-myc activation by modulating miR-628-3p/BPTF axis and degrading BIN1 | 2022 | 23.2 |
| 2 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine | 2020 | 19.9 |
| 3 | YAP mediates compensatory cardiac hypertrophy through aerobic glycolysis in response to pressure overload |
2022 | 19.5 |
| 4 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nature Metabolism,2020, 2,81–96 |
2020 | 13.5 |
| 5 | Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis, Biomaterials,2021, 269:120631 | 2020 | 12.8 |
| 6 | Metabolome Analysis Reveals Excessive Glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK Signaling in Methotrexate-Resistant Primary CNS Lymphoma-Derived Cells, Clinical Cancer Research,2020, 26(11):2754-2766 | 2020 | 11.2 |
| 7 | Inhibition of glycolytic activator PFKFB3 suppresses tumor growth and induces tumor vessel normalization in hepatocellular carcinoma | 2021 | 9.8 |
| 8 | Epigenetic silencing of LncRNA LINC00261 promotes c-myc-mediated aerobic glycolysis by regulating miR-222-3p/HIPK2/ERK axis and sequestering IGF2BP1 | 2021 | 8.8 |
| 9 | PLEKHA5 regulates the survival and peritoneal dissemination of diffuse-type gastric carcinoma cells with Met gene amplification, Oncogenesis,2021, 10(3):25 | 2021 | 7.5 |
| 10 | An iPSC-based neural model of sialidosis uncovers glycolytic impairment-causing presynaptic dysfunction and deregulation of Ca2+ dynamics | 2021 | 7.1 |
| 11 | Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells,Cancer Science,2020, 111(4):1241-1253 | 2020 | 6.7 |
| 12 | Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells | 2020 | 6.5 |
| 13 | Sodium-Glucose Co-Transporter 2 Inhibitors Correct Metabolic Maladaptation of Proximal Tubular Epithelial Cells in High-Glucose Conditions | 2020 | 6.2 |
| 14 | Metabolites Produced by a New Lactiplantibacillus plantarum Strain BF1-13 Isolated from Deep Seawater of Izu-Akazawa Protect the Intestinal Epithelial Barrier from the Dysfunction Induced by Hydrogen Peroxide | 2022 | 6.1 |
| 15 | MicroRNA-505, Suppressed by Oncogenic Long Non-coding RNA LINC01448, Acts as a Novel Suppressor of Glycolysis and Tumor Progression Through Inhibiting HK2 Expression in Pancreatic Cancer | 2021 | 6.1 |
| 16 | Matrine Promotes Human Myeloid Leukemia Cells Apoptosis Through Warburg Effect Mediated by Hexokinase 2, Frontiers in Pharmacology,2019, 10:1069 | 2019 | 5.8 |
| 17 | Mutant KRAS drives metabolic reprogramming and autophagic flux in premalignant pancreatic cells | 2021 | 5.8 |
| 18 | Long Non-Coding RNA TMPO-AS1 Promotes GLUT1-Mediated Glycolysis and Paclitaxel Resistance in Endometrial Cancer Cells by Interacting With miR-140 and miR-143 | 2022 | 5.7 |
| 19 | Circ_0002111/miR-134-5p/FSTL1 signal axis regulates tumor progression and glycolytic metabolism in papillary thyroid carcinoma cells | 2022 | 5.5 |
| 20 | SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells, Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 | 2021 | 5.3 |
| 21 | Metabolic changes in synovial cells in early inflammation: Involvement of CREB phosphorylation in the anti-inflammatory effect of 2-deoxyglucose | 2021 | 4.1 |
| 22 | Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway, Biochemical and Biophysical Research Communications,2019, 510(4):501-507 | 2019 | 3.6 |
| 23 | Neopetrosidines A–D, pyridine alkaloids isolated from the marine sponge Neopetrosia chaliniformis and their cell cycle elongation activity |
2021 | 3.5 |
| 24 | Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway | 2019 | 3.3 |
| 25 | Circ_0000442 functions as a tumor repressor in breast cancer by impacting miR-1229-3p and upregulating ZBTB1 | 2020 | 2.5 |
| 26 | Suppressive Effects of Anisomycin on the Proliferation of B16 Mouse Melanoma Cells In Vitro | 2021 | 2.1 |
| 27 | Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration | 2023 | 15.1 |
| 28 | Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage | 2023 | 4.6 |
| 29 | Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment | 2023 | 6.6 |
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特点：
● 细胞上清液和细胞样品均适用
● 稳定性好
●可使用酶标仪高通量筛选
产品解说
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
试剂盒内含
| 50 tests | 200 tests | |
| Dye Mixture | ×1 | ×1 |
| 葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖) | 150 μl×1 | 600 μl×1 |
| 酶(绿盖) | ×1 | ×1 |
| Assay Buffer | 3.5 ml×1 | 14 ml×1 |
| Reconstitution Buffer(蓝盖) | 350 μl×1 | 1.4 ml×1 |
概述
葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。
葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。
原理
*本试剂盒可以检测细胞上清液＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。
*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。
实验例
用Phloretin抑制葡萄糖的摄取
1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。
2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。
4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。
5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。
6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。
7. 在每孔中加入50 µl工作液。
8. 在37℃培养箱中培养30 min。
9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。
Phloretin抑制葡萄糖的摄取
实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。
常见问题Q&A
| Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？ |
| A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。 |
| Q2：Working Solution的稳定性如何？ |
| A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。 |
| Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？ |
| A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。 |
| Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例? |
| A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。 |
| Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？ |
| A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。 请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」 （1）将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。 ※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。 |
| Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
| A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)
96孔板排列示意图（n=3） |
| Q7:可以测量L-Glucose吗？ |
| A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。 |
参考文献
| No | 检测对象 | 文献 |
| 1 | 小鼠血清 | Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR |
| 2 | 链霉菌 | Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002 |
| 3 | HCT116细胞 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81 |
| 4 | P388白血病细胞 | 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966 |
| 5 | 小鼠精子细胞 | Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9 |
*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。
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特点：
● 享有显色底物WST专利
● 用于L-Glutamate的定量
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
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NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测
NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针
试剂盒内含
产品概述
谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。
Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。
原理
本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。
操作步骤
只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。
实验例
标准曲线的实验例：
样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。
谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：
将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。
结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。
铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:
据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。
Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：
将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。
结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。
<使用产品>
· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）
· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）
· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）
· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）
<实验条件>
细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 药物处理时间：48 h
参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.
常见问题Q&A
| Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？ |
| A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。
100 tests 样品数量(n=3) 24个样品(参照下图) 谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)
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| Q2：配制后的Working solution可以保存多久？ |
| A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。
※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。 |
| Q3：是否可以定量D-Glutamate？ |
| A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。 |
| Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？ |
| A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。 |
| Q5：待测样品可以保存吗？ |
| A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。
细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。 |
| Q6：为什么我的样品孔没有显色？ |
| A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。 |
| Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？ |
| A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)
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参考文献
1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.
2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.
3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.
