同仁化学胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05| 日本DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
胱氨酸摄取能力检测试剂盒
Cystine Uptake Assay Kit
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:常温

特点:

● 可用荧光酶标仪高通量筛选

下载说明书
宣传资料

选择规格:
20tests
100tests

现货

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

产品概述
检测原理
检测实例
与传统方法比较
常见问题Q&A
关联产品

产品概述

胱氨酸(Cystine)是抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的来源,在细胞内的氧化还原平衡中发挥着重要的作用。在癌症研究领域,Sulfasalazine、Erastin等xCT(胱氨酸/谷氨酸反向转运体)抑制剂可以改变细胞内的氧化应激平衡,进而引发细胞死之一的铁死亡。而在免疫研究领域,据报道,巨噬细胞和中性粒细胞在免疫刺激剂的作用下,xCT的表达会增高并增加细胞内的GSH水平,以平衡自身出于攻击癌细胞目的所释放的ROS。因此,无论是对癌细胞的研究还是免疫细胞的研究都离不开胱氨酸摄取能力这一重要指标。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

检测原理

试剂盒内含的胱氨酸类似物(Cystine Analog, CA)与胱氨酸一样可以通过xCT的转运进入细胞内。细胞裂解后通过添加Reducing Agent还原CA并与检测试剂FOdA特异性反应,生成可产生荧光的物质。[专利申请中]

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

检测实例

xCT抑制剂Sulfasalazine, Erastin的抑制效果评价

使用本试剂盒对xCT抑制剂Sulfasalazine和Erastin的抑制效果进行评价。荧光结果显示,两种抑制剂均对胱氨酸的摄取有明显的抑制作用。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

与传统方法比较

以往在胱氨酸摄取检测时一般采用同位素示踪法,下面是本试剂盒与同位素示踪法结果的比较。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

常见问题Q&A

Q1:氨基酸类似物(CA)具体是通过哪种转运体进入细胞内的?
A1:Cystine Analog是通过胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)进入细胞内的。
Q2:目前有检测实绩的细胞有哪些?
A2:下列细胞都有检测实绩:人胶质母细胞瘤细胞, A172

人类肺泡基底上皮细胞, A549

人恶性黑色素瘤细胞, A375

人结肠癌细胞, HCT116

人肝癌细胞, HepG2

人早幼粒白血病, HL60

人纤维肉瘤细胞, HT1080

小鼠胚胎成纤维细胞, MEF

人小细胞肺癌细胞, SBC-5

人胶质瘤细胞, U-251 MG

Q3:氨基酸类似物(CA)进入细胞后会被分解、代谢掉吗?
A3:氨基酸类似物(CA)的构造非常稳定,实验范围内的操作不会被分解或代谢。
Q4:可以用这个试剂盒进行定量检测胱氨酸吗?
A4:本试剂盒不是胱氨酸定量检测试剂盒。
Q5:可以用这个试剂盒对进入细胞内的胱氨酸定量检测吗?
A5:不能定量检测进入细胞内的胱氨酸,本试剂盒是针对细胞摄取胱氨酸能力的数值化检测试剂盒。
Q6:观察不到荧光变化的时候,应该怎么办?
A6:延长CA Uptake solution与细胞的共培养时间(0.5 ~ 1 h)。
Q7:背景荧光较高时,应该怎么办?
A7:环境中可能有未被细胞摄取的胱氨酸类似物残存,用PBS清洗后再进行检测。
Q8:配制CA Uptake solution时,除了不含胱氨酸的无血清培养基以外,还可以使用哪些Buffer?
A8:检测HeLa细胞时,有过使用HBSS或含有0.1% Glucose PBS(+)进行配制的成功实例。
Q9:如何用细胞数对荧光强度进行补正?
A9:可以通过细胞核染色试剂进行补正。也可以使用同仁化学研究所的 Cell Count Normalization Kit (货号C544)进行细胞数补正。
Q10:一般使用哪种孔板比较好?
A10:

下列厂家得孔板有过检测实绩:

公司名/ 产品名/ 货号

Ibidi/ μPlate 96 well ibiTreat black S 15/ Ib89626

AGC techno glass/ EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well/ 5866-096

Thermo Fisher/ 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10/ 165305

Q11:Cystine uptake solution可以长期保存吗?
A11:CA Uptake solution无法长期保存,请提前计算好用量,务必现用现配。

关联产品

产品名 包装 价格 货号
 Glucose Uptake Assay Kit-Blue 1 set 3,980 UP01
    Glucose Uptake Assay Kit-Green 1 set 3,980 UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red 1 set 3,980 UP03

关联产品

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
二价铁离子检测探针—FerroOrange
细胞亚铁离子检测荧光探针

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测
细胞脂质过氧化物检测试剂盒

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen
铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光法)

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
MDA检测试剂盒

同仁化学氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04| 日本DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
氨基酸摄取能力检测试剂盒
Amino Acid Uptake Assay Kit
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

 

● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测

● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力

※注意:您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。 

您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”,查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。

下载说明书
产品文献
宣传资料下载
学习资料

选择规格:
20tests
100tests

现货

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

产品解说
规格性状
产品概述
运用领域
操作步骤
实验例
与传统方法比较
关联产品
常见问题Q&A
产品文献

产品解说

 

规格性状

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

产品概述

氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源,对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此,癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进,造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少,更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现,癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高,说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。

在癌症免疫治疗领域,治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关,免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如,随着免疫细胞的衰老,代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此,通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。

氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后,探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合,发出荧光(λex=360 nm,λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测,通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力,以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。

运用领域

抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外,通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力,还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

操作步骤

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

实验例

使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

<检测条件>

细胞:HeLa cells

培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件:1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min

检测仪器:荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)

检测仪器:荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

<检测条件>

检测仪器:流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)

与传统方法比较

与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比,操作时间大幅减少。

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

关联产品

产品名 包装 价格 货号
 Glucose Uptake Assay Kit-Blue 1 set 3,980 UP01
    Glucose Uptake Assay Kit-Green 1 set 3,980 UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red 1 set 3,980 UP03

常见问题Q&A

 

Q:推荐什么类型的微孔板?
A:我们推荐以下几种微孔板

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

微孔板的类型对检测结果有何影响,请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗?】获取更多信息。

 

Q:微孔板的类型会影响结果吗?
A:是的。并非所有微孔板都与该测定兼容,有些微孔板可能无法进行某些测量(参见参考数据)。

建议使用以下板检测

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

<参考:微孔板之间的比较>

使用Ibidi板和其他制造商的微孔板,我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH(2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸)存在下摄取氨基酸的能力。然而,我们无法确认BCH对吸收的抑制,因为与推荐的Ibidi板相比,在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。

荧光显微镜观察

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

荧光酶标仪检测结果

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

 

 

Q:BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的?
A:有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外,同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。

 

 

 

Q:已经有检测实例的细胞系有哪些?
A:贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251;悬浮细胞有MOLT4。

 

Q:BPA被细胞摄入后,是否会被分解或代谢掉?
A:BPA的构造非常稳定,实验操作范围的过程中不会被分解。
Q:BPA被细胞摄入后,能否进行固定化操作?
A:由于探针会从细胞内向细胞外泄漏,所以无法进行染色后的固定化操作。

 

Q:BPA被细胞摄入后,是否会在特定部位积累?
A:被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。

 

Q:BPA uptake solution,Working solution能否长时间保存?
A: BPA uptake solution,Working solution无法长期保存,请现配现用。
Q:如果荧光信号没有变化,我该怎么办?
A:主要可能的原因有以下两点:      ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution

的浓度。(5~50倍稀释)

②Working solution发生变质,请重新配置Working solution,保证现配现用。

Q:如果荧光背景较高, 我该怎么办?
A: 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。
Q:BPA是否可以定量检测?
A:无法进行定量检测,本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04

产品文献

1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.

2、Wencan Zhang,Xu Cao,Xiancai Zhong,Hongmin Wu,Yun Shi,Mingye Feng,Yi-Chang Wang, David Ann,Yousang Gwack,Yate-Ching Yuan,Weirong Shang ,and Zuoming Sun,”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″,2023PNAS【11.1】doi:10.1073/pnas.2221352120.

关联产品

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit
糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
Lactate Assay Kit-WST试剂盒
乳酸检测试剂盒

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒
氧消耗量检测试剂盒

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green
葡萄糖摄取检测试剂盒

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号:UP04
ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence
ADP/ATP比率检测试剂盒

Glucose Cellular Uptake Measurement Kit (Broad Range, Fluorometric) 品牌:Cosmo Bio


Glucose Cellular Uptake Measurement Kit (Broad Range, Fluorometric)

品牌:Cosmo Bio
CAS No.:
储存条件:4℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

CSR-MBR-PMG-K01

100 Tests 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

2-Deoxyglucose (2DG) Uptake Measurement Kit 品牌:Cosmo Bio


2-Deoxyglucose (2DG) Uptake Measurement Kit

品牌:Cosmo Bio
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

CSR-OKP-PMG-K01

50 rxns 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

2-Deoxyglucose (2DG) Uptake Measurement Kit 品牌:Cosmo Bio


2-Deoxyglucose (2DG) Uptake Measurement Kit

品牌:Cosmo Bio
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

CSR-OKP-PMG-K01H

25 rxns 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。