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品牌：Cosmo Bio
CAS No.： 储存条件：4℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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CSR-MBR-PMG-K01 |
– | 100 Tests | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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品牌：Cosmo Bio
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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CSR-OKP-PMG-K01 |
– | 50 rxns | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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品牌：Cosmo Bio
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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CSR-OKP-PMG-K01H |
– | 25 rxns | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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特点：
● 灵敏度高，操作简便
● 操作简单三步即可完成实验
● 无需清洗细胞
产品解说
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒使用Fatty Acid Uptake Probe作为脂肪酸类似物，通过位于细胞膜表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞，可以通过荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪等荧光测量方法检测细胞的摄取能力。此外，该试剂盒配备了Quenching Buffer，可消除未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe的荧光，因此无需清洗细胞也可以检测。
检测产品优势
为什么脂肪酸摄取能力越来越受到关注？
脂肪酸是为生物体供应能量的重要物质。脂肪酸摄取能力不仅与肥胖和糖尿病等疾病有关，也是癌细胞的代谢指标之一（左下图）。细胞增殖活跃的癌细胞往往需要很多脂质，所以细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取很活跃（右下图）。因此，以癌细胞的脂肪酸代谢途径为目标，开发了很多药物。
用单个试剂盒即可解决整个脂肪酸摄取实验！
本试剂盒所内含的脂肪酸类似物通过脂肪酸转运体被转运至细胞内，再通过荧光探针（荧光法）检测该类似物的摄入量【检测原理】。Quenching buffer可以省去清洗操作的麻烦和时间成本，进行检测【操作步骤】。
检测原理
操作步骤
检测仪器
HepG2细胞通过添加脂肪酸转运蛋白抑制剂CB-2，在不同仪器中检测其脂肪酸摄取能力的变化。
选择指南
Washing Buffer或Quenching Buffer的选择指南
请参考下表，根据细胞种类和实验系统（操作和测量装置）选择Washing Buffer或Quenching Buffer。
〇：可测量、×：不可测量、△：参考注释
| Washing Buffer (10×) | Quenching Buffer | ||||
| 贴壁细胞 | 悬浮细胞 | 贴壁细胞 | 悬浮细胞 | ||
| 清洗操作 | 必要 | 不需要 | |||
| 荧光酶标仪 | 底部读数（透明底） | 〇 | 〇 | △※1 | |
| 顶部读数 | 〇 | × | |||
| 荧光显微镜 | 〇 | 〇 | |||
| 激光共聚焦显微镜 | 〇 | △※2 | |||
| 流式细胞仪 | 〇 | × | |||
※1接种的细胞需要覆盖板底（大约：3x105cells/well），使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。
※2使用激光共聚焦显微镜时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer稀释10倍后使用,如果不能使用ex:488nm,请使用ex:640nm进行检测。
实验例
确认细胞中脂肪酸代谢状态
在A549细胞中添加不含葡萄糖或含有25mmol/l葡萄糖的DMEM培养基，制备了正常状态（control）和饥饿状态（Starved）的两组细胞。使用本试剂盒对两组细胞进行染色，并使用荧光显微镜观察。
结果显示，在对照组细胞中，荧光素大多聚集在脂肪滴中，而在饥饿状态的细胞中荧光素主要集中在线粒体和内质网上。由此可看出在饥饿状态下的细胞脂肪酸代谢的变化。
对照组细胞和饥饿组细胞的荧光图
*供参考的可检测数：35 mm dish 10块、 96孔板 1 块
产品Q&A
| Q: 可用于哪些种类的细胞 |
| A：在下述细胞中有使用实例。 |
| 细胞 | 由来 |
| A549 | 人肺泡基底上皮腺癌细胞 |
| HepG2 | 人肝癌细胞 |
| HeLa | 人宫颈癌细胞 |
| Jurkat | 人白血病T细胞 |
| MOLT-4 | 人急性淋巴白血病细胞 |
| 3T3-L1 (preadipocyte) | 前脂肪細胞 |
| 3T3-L1 (adipocyte) | 脂肪細胞 |
| Q: 将Fatty Acid Uptake Probe孵育进活细胞后，可以固定细胞吗？ |
| A：<实验例>使用4%PFA固定染色后的细胞实验案例
Protocol:贴壁细胞 1. 将制备好的细胞接种在培养皿或96孔板上； 2. 用无血清培养基洗涤两次； 3. 加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO2存在下）中静置孵育15 min; 4. 去除上清液，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃、5%CO2存在下）中静置15 min； 5. 去除上清液，用Washing Buffer solution清洗1次； 6. 向细胞中加入4%PFA/PBS并在室温下孵育5 min； 7. 用PBS洗涤细胞3次，用荧光显微镜检测，荧光酶标仪检测。
※固定会降低荧光强度 悬浮细胞 1. 取细胞样品至微管中； 2. 300×g离心5min，去除上清液; 3. 加入无血清培养基，300×g离心5min，去除上清液,重复两次; 4. 加入无血清培养基，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min； 5. 300×g离心5 min，去除上清液; 6. 加入Fatty Acid Uptake Probe working solution，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min ； 7. 300×g离心5min，去除上清液; 8. 用Washing Buffer solution清洗一次； 9. 加入4%PFA/PBS，混匀细胞，在室温下孵育5 min; 10. 300×g离心5 min，去除上清液; 11. 加入PBS，混匀细胞,300×g离心5 min，去除上清液；重复两次。 12. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
|
| Q: 用荧光酶标仪检测时，应该用哪种板子？ |
| A: 检测荧光，请使用细胞培养用的黑色孔板。 |
〇：可使用、×：不可使用、△：参考注释
| 贴壁细胞 | 悬浮细胞 | ||||
| 不透明底 | 透明底 | 不透明底 | 透明底 | ||
| Washing Buffer (10×) | Top Reading | 〇 | 〇 | ||
| Bottom Reading | × | 〇 | × | 〇 | |
| Quenching Buffer | Top Reading | × | × | ||
| Bottom Reading | × | 〇 | × | △※ | |
※接种的细胞需要覆盖板底，使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。
〈使用Quenching Buffer时，悬浮细胞的数据〉
实验案例使用孔板：
| 厂家 | 产品名 | Cat No. |
| ibidi | µPlate 96 well ibiTreat black S 15 | ib89626 |
| Thermo Fisher | 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 | 165305 |
| Q: Fatty Acid Uptake Probe working solution可以保存吗？ |
| A：无法保存。 |
| Q：背景较高怎么办？ |
| A：样品中可能存在未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe。可重复使用Washing Buffer solution清洗，或者考虑使用Quenching Buffer。 |
| Q：试剂盒可检测的样品数量是多少？ |
| A：请参照下表。 |
| 贴壁细胞 | 悬浮细胞 | ||||
| 培养皿
（添加量） |
6 well
(1.5 ml/well) |
24-well
(0.3 ml/well)
|
96-well
(0.1 ml/well)
|
35-mm dish
(1.5 ml/well)
|
1.5-ml microtube
(0.5 ml/tube)
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| 样本数 | 7 sample | 34 sample | 100 sample | 7 sample | 20 sample |
| Q：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测，应该怎么做？ |
| A：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer solution稀释10倍后使用，或者使用640nm激发光检测。
<用用激光共焦显微镜进行透射光观察时所看到的现象>
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| Q：可以进行脂肪酸定量吗？ |
| A：不能使用本产品定量脂肪酸。 |
| Q：可以量化细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe吗？ |
| A：无法定量细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe。该试剂是为了确认脂肪酸摄取能力的增减的配合用试剂。 |
| Q：可以和其他荧光染料共染吗？ |
| A：Fatty Acid Uptake Probe是使用红色荧光观察。因此，请使用绿色或者红色荧光检测以外的试剂进行共染色。
与本公司线粒体染色试剂MitoBright LT Deep Red（MT12）共染色的实绩。 〈进入红色荧光〉
〈与MitoBright LT Deep Red共染色〉 1. 制备细胞样品接种到培养皿或者孔板中； 2.去除培养基，用无血清培养基洗涤两次； 3.加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min； 4.去除上清液后，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min； 5. 去除上清液后，添加0.1µmol/l MitoBright LT working solution，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置30 min； 6. 去除上清液后，用HBSS洗涤两次； 7.加入HBSS并用荧光显微镜观察。
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| Q: 荧光显微镜观察时有什么注意事项吗？ |
| A：荧光显微镜观察时，如果持续照射激发光，Fatty Acid Uptake Probe的荧光可能会淬灭。请控制连续的激发光的照射次数。
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特点：
● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力
※注意：您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。
您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”，查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。
产品解说
规格性状
产品概述
氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。
在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。
氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。
本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。
运用领域
抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。
操作步骤
实验例
使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。
＜检测条件＞
细胞：HeLa cells
培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）
培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)
<检测条件>
检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)
与传统方法比较
与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。
关联产品
| 产品名 | 包装 | 价格 | 货号 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Blue | 1 set | 3,980 | UP01 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Green | 1 set | 3,980 | UP02 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Red | 1 set | 3,980 | UP03 |
常见问题Q&A
| Q：推荐什么类型的微孔板？ |
| A：我们推荐以下几种微孔板
微孔板的类型对检测结果有何影响，请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗？】获取更多信息。 |
| Q：微孔板的类型会影响结果吗？ |
| A：是的。并非所有微孔板都与该测定兼容，有些微孔板可能无法进行某些测量（参见参考数据）。
建议使用以下板检测
<参考：微孔板之间的比较> 使用Ibidi板和其他制造商的微孔板，我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH（2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸）存在下摄取氨基酸的能力。然而，我们无法确认BCH对吸收的抑制，因为与推荐的Ibidi板相比，在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。 荧光显微镜观察
荧光酶标仪检测结果
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| Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？ |
| A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。 |
| Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？ |
| A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？ |
| A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？ |
| A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？ |
| A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。 |
| Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？ |
| A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。 |
| Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？ |
| A：主要可能的原因有以下两点： ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution
的浓度。(5~50倍稀释) ②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。 |
| Q：如果荧光背景较高， 我该怎么办？ |
| A： 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。 |
| Q：BPA是否可以定量检测？ |
| A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。 |
产品文献
1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.
2、Wencan Zhang，Xu Cao，Xiancai Zhong，Hongmin Wu，Yun Shi，Mingye Feng，Yi-Chang Wang， David Ann，Yousang Gwack，Yate-Ching Yuan，Weirong Shang ，and Zuoming Sun，”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″，2023，PNAS【11.1】，doi：10.1073/pnas.2221352120.
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