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品牌：Cosmo Bio
CAS No.： 储存条件：4℃ DNF 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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PMC-AK19F |
– | 1 Set | – | 咨询 | – | – |
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品牌：Asti Sci
CAS No.： 储存条件：室温 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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305-95871 |
– | 1 kit | – | 咨询 | – | – |
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品牌：Enzo
CAS No.： 储存条件：+4℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ADI-900-002 |
– | 96 wells | – | 6,450.00 | – | – |
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特点：
● 享有显色底物WST专利
● 用于L-Glutamine的定量
产品解说
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凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.3. Glutamate Assay Kit-WST 谷氨酸的定量检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针
试剂盒内含
产品概述
谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。
Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。
原理
本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。
操作步骤
*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。
由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。
样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)
实验例
标准曲线的实验例：
样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。
谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：
将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。
结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。
常见问题Q&A
| Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
| A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。
100 tests 样品数量(n=3) 12个样品(参照下图) 谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)
＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。 样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液) |
| Q2：配制后的Working solution可以保存多久？ |
| A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。 |
| Q3：是否可以定量D-Glutamine？ |
| A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。 |
| Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？ |
| A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。 |
| Q5：待测样品可以保存吗？ |
| A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。
细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。 |
| Q6：为什么我的样品孔没有显色？ |
| A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。 |
| Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？ |
| A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)
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参考文献
1、K. Hayashima, H. Katoh, “Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis”, J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.
2、R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, “Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a”, Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.
3、S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, “Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions”, 2022, Int. J. Mol. Sci., doi:10.1016/j.snb.2021.130554.
4、M Chen, G Wang, Z Xu, J Sun, B Liu, L Chang, J Gu, Y Ruan, X Gao,S Song,Loss of RACK1 promotes glutamine addiction via activating AKT/mTOR/ASCT2 axis to facilitate tumor growth in gastric cancer,Cellular Oncology, 2023,doi:https://doi.org/10.1007/s13402-023-00854-1.
关联产品
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特点：
● 标记的物质可以在大约2个小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
试剂盒内含
产品概述
ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH2是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH2-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH2（代码：LK01），HiLyte FluorTM 555标记套件–NH2（代码：LK14），HiLite FluorTM 647标记套件–NH2（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH2反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。
该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。
原理
操作步骤
使用注意事项:
如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。
操作步骤：
a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。
c) NH2-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH2-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH2-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。
d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH2-Reactive ICG溶液。
e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。
产品优势
1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
ICG标记实验例
图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。
仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)
小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)
肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)
检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm
抗体：整合素α2抗体 曝光时间：10s
荧光特性
常见问题Q&A
| Q1: 标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
参考文献
| 1) M. Ogawa, C. A. S. Regino, J. Seidel, M. V. Green, W. Xi, M. Williams, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Dual-Modality Molecular Imaging Using Antibodies Labeled with Activatable Fluorescence and a Radionuclide for Specific and Quantitative Targeted Cancer Detection”, Bioconjugate Chem., 2009, 20(11), 2177. |
| 2) M. Ogawa, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “In vivo Molecular Imaging of Cancer with a Quenching Near-Infrared Fluorescent Probe Using Conjuates of Monoclonal Antibodies and Indocyanine Green”, Cancer Res., 2009, 69(4), 1268. |
| 3) N. Kosaka, M. Ogawa, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Clinical implications of near-infrared fluorescence imaging in cancer”, Future Oncology, 2009, 5(9), 1501. |
| 4) 伊藤進, 六車直樹, 林重仁, 日下至弘, 多田津昌也, 多田津陽子, 岡本耕一, 井本佳孝, 稲山久美, 坂東輝美, 田岡聡子, 高川真由子, 矢野充保, 伊井邦雄, 長尾善光, 佐野茂樹, 芝村誠一, 島田典昭, 石田和彦, 中村一成, “赤外線蛍光内視鏡の原理と臨床応用”, Biomedical THERMOLOGY, 2003, 23(2), 77. |
| 5) S. Ito, N.Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, K. Inayama, M. Sogabe, T. Okahisa, S. Okamura, H. Shibata, T. Irimura, K. Takesako and S. Shibamura, “Development of Agents for Reinforcement of Fluorescence on Near-infrared Ray Excitation for Immunohistological Staining”, Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 613. |
| 6) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kakehashi, S. Hayashi, S. Okamura, H. Shibata, T. Okahisa, M. Kanamori, S. Shibamura, K. Takesako, M. Nozawa, K. Ishida and M. Shiga, “Development of Fluorescence-Emitting Antibody Labeling Substance by Near-Infrared Ray Excitation”, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1995, 5, 2689. |
| 7) K. Inayama, S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, T. Bando, Y. Tadatsu, M. Tadatsu, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study of an Agent for Reinforcement of Near-infrared Fluorescence on Tumor Tissue”, Digestive and Liver Disease, 2003, 35, 88. |
| 8) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, Y. Kusaka, M. Yano, S. Ichikawa, A. Hiasa, T. Omoya, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Nakamura, K. Takesako, Y. Goto and S. Shibamura, “Visualization of Human Gastric Cancer with a Novel Infrared Fluorescent Labeling Marker of Anti-carcinoembryonic Antigen Antibody in vitro”, Dig. Endosc., 2000, 12, 33. |
| 9) S. Taoka, S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, Y. Kusaka, K. Ii, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura, “Reflected Illumination-type Imaging System for the Development of Infrared Fluorescence Endoscopy”, Dig. Endosc.,1999, 11(4), 321. |
| 10) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, A. Tsutsui, T. Fukuda, T. Okahisa, Y. Ohkita, H. Matsunaga, I. Shimizu, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura,”Development of an Imaging System Using Fluorescent Labeling Substances Excited by Infrared Rays”, Dig. Endosc., 1997, 9, 278. |
| 11) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Inayama, Y. Musashi, M. Yano, T. Bando, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Takesako, H. Takeuchi and S. Shibamura, “Detection of Human Ganstric Cancer of Resected Specimens Using a Novel Infrared Fluorescent Anti-Human Carcinoembryonic Antigen Antibody with an Infrared Fluorescence Endoscope in Vitro”, Endoscopy, 2001, 33(10), 849. |
| 12) N. Muguruma, S. Ito, T. Bando, S. Taoka, Y. Kusaka, S. Hayashi, S. Ichikawa, Y. Matsunaga, Y. Tada, S. Okamura, K. Ii, K. Imaizumi, K. Nakamura, K. Takesako and S. Shibamura, “Labeled Carcinoembryonic Antigen Antibodies Excitable by Infrared Rays: a Novel Diagnostic Method for Micro Cancers in the Digestive Tract”, Internal Medicine, 1999, 38(7), 537. |
| 13) T. Bando, N. Muguruma, S. Ito, Y. Musashi, K. Inayama, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Ii, T. Irimura, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study on a Labeled anti-mucin Antibody Detectable by Infrared-fluorescence Endoscopy”, J. Gastroenterol., 2002, 37, 260. |
| 14) N. Muguruma, S. Ito, S. Hayashi, S. Taoka, H. Kakehashi, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Antibodies Labeled with Fluorescence-agent Excitable by Infrared Rays”, J. Gastroenterol., 1998, 33, 467. |
| 15) 伊藤進, 六車直樹,“不可視情報の画像化－新しい内視鏡診断学の展望 (5)赤外蛍光を用いた微小癌診断”, 臨牀消化器内科, 1999, 14(8), 1205. |
| 16) W. Aung, A. Tsuji, H. Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga, “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1. |
