Protocol:贴壁细胞

1.     将制备好的细胞接种在培养皿或96孔板上；

2.     用无血清培养基洗涤两次；

3.     加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO₂存在下）中静置孵育15 min;

4.     去除上清液，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃、5%CO₂存在下）中静置15 min；

5.     去除上清液，用Washing Buffer solution清洗1次；

6.     向细胞中加入4%PFA/PBS并在室温下孵育5 min；

7.     用PBS洗涤细胞3次，用荧光显微镜检测，荧光酶标仪检测。

※固定会降低荧光强度

悬浮细胞

1.      取细胞样品至微管中；

2.      300×g离心5min，去除上清液;

3.      加入无血清培养基，300×g离心5min，去除上清液,重复两次;

4.      加入无血清培养基，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

5.      300×g离心5 min，去除上清液;

6.      加入Fatty Acid Uptake Probe working solution，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min ；

7.      300×g离心5min，去除上清液;

8.      用Washing Buffer solution清洗一次；

9.      加入4%PFA/PBS，混匀细胞，在室温下孵育5 min;

10.    300×g离心5 min，去除上清液;

11.    加入PBS，混匀细胞,300×g离心5 min，去除上清液；重复两次。

12.    用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

（添加量）

(1.5   ml/well)

(0.3   ml/well)

(0.1   ml/well)

(1.5   ml/well)

(0.5   ml/tube)

<用用激光共焦显微镜进行透射光观察时所看到的现象>

与本公司线粒体染色试剂MitoBright LT Deep Red（MT12）共染色的实绩。

〈进入红色荧光〉

〈与MitoBright LT Deep Red共染色〉

1. 制备细胞样品接种到培养皿或者孔板中；

2.去除培养基，用无血清培养基洗涤两次；

3.加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

4.去除上清液后，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

5. 去除上清液后，添加0.1µmol/l MitoBright LT working solution，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置30 min；

6. 去除上清液后，用HBSS洗涤两次；

7.加入HBSS并用荧光显微镜观察。