同仁化学Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒| 日本DOJINDO

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-
商品信息
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特点:

● 适合组织检测

● 配有标准品,可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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50tests

现货

 
组织/细胞检测

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

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试剂盒内含
产品概述
原理
金属离子选择性
加标回收实验
实验例
参考文献

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试剂盒内含

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一,生物体内铁元素的含量虽少,但有着重要的生理作用。近年来,随着铁死亡概念的提出,细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ,可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度,即可确定组织样品中的二价铁含量。同时,还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁,以确定总铁含量,进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

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金属离子选择性

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加标回收实验

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

实验例

组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织 。

2. 加入 1 ml冷 PBS,移液器吹打 20次, Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min,去除上清 。

3. 将样品转移至研钵,加入液氮充分研磨成粉末后,加入 1.3 ml Assay Buffer,回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。(为防止样品温度上升,每 1 min间隔置于冰浴上 20 s)。

5. 16,000 g离心 10 min,除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液,每管分别加入 400 μl上清液,制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管 中加入 Reducer solution。 (参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl)。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2,加入至 96孔板中 37 培养 60 min,检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”,自动计算 出二价铁和三价铁浓度。

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

参考文献

No.       检测对象                                           引用 (含链接) 影响因子
1 组织

(小鼠肿瘤组织)

H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade   bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger   robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B2021,   doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005. 7.097
2 细胞

Kasumi-1

(人急性白血病细胞)

L.   Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based   Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron   Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct.   Mater.2021, doi: 10.1002/adfm.202107195. 18.808
3 细胞

(II型肺泡细胞)

H.   Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo,   “Iron   deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the   development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta,   Mol. Basis Dis.2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204. 5.187
4 细胞

MV4-11; Kasumi-1; NB4

(白血病细胞)

Y.   Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S.   Feng, “Gold   Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine   Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid   Leukemia”, ACS Nano2021, doi:   10.1021/acsnano.1c05547. 15.881
5 组织

(人软骨组织)

H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X.   Li, “Contribution   of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”,   EBioMedicine2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847. 8.143
6 组织

(小鼠肺、肝脏、肾脏)

T.   Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene   quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”,   Food Chem. Toxicol.2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971. 6.023
7 组织

(小鼠海马组织)

T.   Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped   graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium   homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol.2022,   doi: 10.1186/s12989-022-00464-z. 9.4
8 组织

(宫颈管粘膜)

T.   Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and   R. Ju, “Persistent   ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and   oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV   infection”, 2022Cell Death Discovery, doi:   10.1038/s41420-022-01013-5. 5.241
9 组织

(小鼠肺组织)

M.   Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic   induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated   mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”,   Ecotoxicol. Environ. Saf.2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595. 6.291
10 细胞

BEL-7402, SMMC-7721

(人肝癌细胞系)

L.   Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC   Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the   miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022Oxid. Med. Cell.   Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095. 6.543
11 组织

(小鼠肺部组织)

Z.   Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao,   X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway   epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”,   FASEB J.2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR. 5.191
12 组织

(大豆叶片)

Y.   Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H.   Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis   induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances   soybean resistance to Phytophthora sojae”,   Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248. 5.476
13 组织

(小鼠睾丸组织)

Y.   Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is   critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via   targeting transferrin receptor”, Redox Biol.2022,   doi: 10.1016/j.redox.2022.102584. 10.787
14 组织

(小鼠结肠组织)

F.   Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y.   Lin, D. Li, “pH-sensitive   Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy   in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol.   Res.2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645. 10.334
15 组织

(小鼠肺部组织)

W.   Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S.   Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of   ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of   acupuncture”, Int. Immunopharmacol.2023, doi:   10.1016/j.intimp.2022.109670. 5.714
16 组织

(小鼠心脏组织)

H.   Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu,   R. Zhang, “Mechanism   of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere2023,   doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749. 8.943
17 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

L.   Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y.   Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers   resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell   carcinoma”, Cell Death Dis.2023, doi:   10.1038/s41419-023-05719-x. 9.685
18 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

C.   Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X.   Yang, W. Liao, “Protective   efficacy of Schizandrin B on ameliorating   nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo   and in vitro”, 2023Int. Immunopharmacol.,   doi:10.1016/j.intimp.2023.110042. 5.714
19 组织

(小鼠肺部组织)

B.   Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y.   Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside   attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar   epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022,   Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1. 7.525
20 组织

(小鼠睾丸组织)

J.   Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue   alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by   resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm.   Biol.2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114. 3.889
21 细胞

(人髓核细胞)

X.   Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J.   Zhao, “Polydopamine   Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration   Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4   Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216. 17.521
22 组织

(小鼠心脏组织)

J.   Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang,   J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The   Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in   Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023,   doi:10.1002/advs.202206007. 17.521
23 细胞

(H9c2, 4T1)

T.   Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles   Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis   Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689. 19.923
24 细胞

(乳腺癌细胞)

Z.   ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J.   Tang., “GATA3   mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction   in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023,   doi:10.1016/j.drup.2023.100974. 22.841
25 组织

(the brains of 3 × Tg-AD mice)

Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962

 

7.9
26 组织

(Testicular tissues)

Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”,Ecotoxicology and Environmental Safety,2023,doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309 6.8
27 细胞(macrophage) Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”,Thromb Haemost2023,doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916 6.7
28 细胞(HT-22) Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”,Antioxidants2023,doi.org/10.3390/antiox12122097 7.0

同仁化学Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291| 日本DOJINDO

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-
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● 组织检测

● 配有标准品,可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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铁死亡通路图

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价格:

Fe2+和 Fe3+检测

操作简便

组织/细胞检测

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

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原理
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实验例
参考文献

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凑单关联产品TOP5

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试剂盒内含

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一,生物体内铁元素的含量虽少,但有着重要的生理作用。近年来,随着铁死亡概念的提出,细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ,可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度,即可确定组织样品中的二价铁含量。同时,还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁,以确定总铁含量,进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

金属离子选择性

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

加标回收实验

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

实验例

组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织 。

2. 加入 1 ml冷 PBS,移液器吹打 20次, Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min,去除上清 。

3. 将样品转移至研钵,加入液氮充分研磨成粉末后,加入 1.3 ml Assay Buffer,回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。(为防止样品温度上升,每 1 min间隔置于冰浴上 20 s)。

5. 16,000 g离心 10 min,除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液,每管分别加入 400 μl上清液,制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管 中加入 Reducer solution。 (参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl)。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2,加入至 96孔板中 37 培养 60 min,检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”,自动计算 出二价铁和三价铁浓度。

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291

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参考文献

Hao Ren,et.cl,“Self-assembled FeS-based cascade bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger robust cancer immunotherapy”,APSB,2020,DOI:10.1016/j.apsb.2021.05.005

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细胞脂质过氧化物检测试剂盒

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铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光法)

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MDA检测试剂盒
MDA检测

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同仁化学Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551| 日本DOJINDO

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Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551
Caspase-3检测试剂盒-比色法
Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

特点:

· 酶标仪检测,操作简单

· 稳定性好,保存时间长

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Caspase3宣传资料

选择规格:
50 tests

细胞凋亡

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

活动进行中
产品概述
凋亡相关检测方法
试剂概要
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
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参考文献

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NO.1.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测   

NO.2.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.3.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST   乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.4.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.5.    ROS Assay Kit    活性氧检测

产品概述

Caspase是 与细胞凋亡密切相关的重要的一组蛋白酶。其中 Caspase-3是 细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶,因此 Caspase-3经常被作为细胞凋亡的标志物来进行检测。同仁化学研发的 Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-是 一套操作简单的 比色法胞内 Caspase-3活性 检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒相比,由于具有更高的灵敏度,因此可以在更短的培养时间内快速检测。 通过比较凋亡组细胞和正常组细胞的 pNA吸光度,即可确定 Caspase-3活性 的增加倍率。

凋亡相关检测方法

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

试剂概要

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

操作步骤

Lysis Buffer的 配制

向Lysis Buffer瓶 中 加入 10 ml Reconstitution Buffer后 超声波震荡 2 min。 (建议使用注射器添加 Reconstitution Buffer。如不使用注射器,请注意瓶内为真空状态,剥除铝制封口 和 打开橡胶瓶盖时请小心操作。)

Lysis Buffer配制好后需 -20 保存。

配制好的 Lysis Buffer 在 -20 可稳定保存 1 个月 。

经 测试 Lysis Buffer 反复冻融 8次以内 可正常使用 。

Assay Buffer的 配制

向Assay Buffer瓶 中 加入 3 ml Reconstitution Buffer后 超声波震荡 2 min。(建议使用注射器添加 Reconstitution Buffer。如不使用注射器,请注意瓶内为真空状态,剥除铝制封口 和 打开橡胶瓶盖时请小心操作。)

Assay Buffer配制好后需 -20 保存。

配制好的 Assay Buffer 在 -20 可稳定保存 1 个月 。

经测试, Assay Buffer 反复冻融 8次以内 可正常使用 。

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

实验例

1. 将 Jurkat细胞( 3.38×106 Cells/ ml)接种到两个 100 mm培养皿中 (两个培养皿中 分别 含

有 0 μmol/ l和 5 μmol/ l Staurosporine的 RPMI培养基 并在 5 CO2培养箱中 37 培

养 5小时。

2. 将细胞收集到两个不同的锥形管中并离心( 300×g 3 min 。

3. 去除 上清液后 ,用 1 ml PBS重悬细胞 。

4. 离心( 300×g 3 min)后 去除 上清液。

5. 将 Lysis Buffer 200 μl)加入 至 每个管中。

6. 将两个样品在冰上孵育 15 min。

7. 将两个样品离心( 10,000×g 1 min)。

8. 将每个样品的上清液转移到新的微管中 。

9. 通过 Bradford法定量每个上清液中的蛋白质浓度。

10. 使用 Lysis Buffer将每个样品的蛋白质浓度调节至 1.0mg / ml。

11. 将 Substrate 10 μl Assay Buffer 40 μl)和样品 50 μl)加入 至 96孔板 中。

12. 37 培养 2 h。

13. 用酶标仪测定 405nm处的吸光度 。

Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:C551

常见问题Q&A

 Q1:实验结果吸光度低怎么办?
本试剂盒,完全显色时,405 nm检测OD值约为0.5左右。如诱导凋亡后样品的吸光度低于0.1,请确认是否为以下原因。

<原因1>

孵育时间不足。

请延长孵育时间后测定,可过夜培养。

<原因2>

蛋白质量不足。

由于缓冲液中含有DTT,请使用Bradford的方法检测蛋白质含量,并通过增加细胞数量的方法,准备蛋白质浓度为1-3 mg/ml的细胞裂解液,。

<原因3>

Caspase-3活化不足。

Caspase-3激活可能不足。 请考虑优化诱导细胞凋亡的条件(药物浓度和治疗时间)。

(阳性对照,可参考使用说明书中的Staurosporine进行诱导。)

 Q2:本试剂盒可以检测几个样品?
该试剂盒可检测50 tests。

当复孔以n = 3进行测量时,可以测量15个样品,不包括空白。

 Q3:误差很大的原因是什么?
如测量的孔中有气泡,则会增加测量误差。在测量前请确保已去除气泡。
 Q4:如何作成标准曲线?
该试剂盒中不包括标准品(p-Nitroaniline)。 需要您自行准备,并可按照以下步骤作成校准曲线。

(1)将p-Nitroaniline溶于DMSO中,制备浓度为20 mmol / l的DMSO储存溶液。

(2)用396 µl Lysis Buffer 稀释4 µl p-Nitroaniline DMSO储备液,以制备200 µmol / l的标准品溶液。 并将该标准品溶液依次稀释2倍,制备出浓度分别为200、100、50、25、0 µmol / l的标准品溶液。

(3)向每孔中加入10 µl Substrate,40 µl Assay Buffer和50 µl标准溶液。

(4)37°C下孵育2小时。

(5)用酶标仪测量405 nm处的吸光度。

(6)通过试剂中Caspase-3的显色作成p-Nitroaniline含量的标准曲线。

 

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参考文献

1) S. Zhang, J. Zhou, Q. Fan, X. Lv, T. Wang, F. Wang, Y. Chen, S. Hong, X. Liu, B. Xu, L. Hu, C. Zhang, Y. Zhang, “Discovery of hydroxytyrosol as thioredoxin reductase 1 inhibitor to induce apoptosis and G1/S cell cycle arrest in human colorectal cancer cells via ROS generation”,Exp. Ther. Med.2021, doi:10.3892/etm.2021.10261.

2) B. Wang, Q. Sun, W. Ye, L. Li and P. Jin, “Long non‑coding RNA CDKN2B‑AS1 enhances LPS‑induced apoptotic and inflammatory damages in human lung epithelial cells via regulating the miR‑140‑5p/TGFBR2/Smad3 signal network”,BMC Pulm. Med.2021, doi:10.1186/s12890-021-01561-z.

3) Z. Lin, S. Yang, Y. Zhou, Z. Hou, L. Li, M. Meng, C. Ge, B. Zeng, J. Lai, H. Gao, Y. Zhao, Y. Xie, S. He, W. Tang, R. Li, J. Tan, W. Wang., “OLFM4 depletion sensitizes gallbladder cancer cells to cisplatin through the ARL6IP1/caspase-3 axis”,Translational Oncology2022, doi:10.1016/j.tranon.2021.101331.

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