OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液) 货 号 #M0482L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L

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100 次反应(50 μl 反应体系)
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OneTaq 热启动 Quick-Load 2X 预混液(提供 GC 缓冲液)

OneTaq 聚合酶信息

OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L

概述

合酶与 Deep Vent DNA 聚合酶的混合物,可用于常规与复杂的 PCR 实验。Deep Vent DNA 聚合酶的 3´→5´ 外切酶活性提升了 Taq DNA 聚合酶的保真性和聚合能力。OneTaq 反应缓冲液与 High GC Enhancer的组合使得无论模板的 GC 含量高低,都只需最小的优化即能获得最高的产量。

OneTaq 热启动 DNA 聚合酶

OneTaq 热启动 DNA 聚合酶利用核酸适配体(aptamer)作为抑制剂,不仅使用方便,而且减少了引物二聚体和其他次级产物对反应的干扰。

这种核酸适配体抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合,当温度低于 45℃ 时抑制聚合酶活性,因而能够在室温下建立反应。在正常的热循环条件下 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶即能被激活,无需额外的高温启动步骤。因此 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶能够替换常规的或现有的基于 Taq DNA 聚合酶的 PCR 反应。

与 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶一同提供的有标准反应缓冲液、GC 反应缓冲液和 High GC Enhancer。根据模板的 GC 含量选择缓冲液的建议见下文。

其它剂型

OneTaq 热启动 DNA 聚合酶均有预混液剂型。预混液有标准或 GC 缓冲液可供选择,High GC Enhancer 随 GC 缓冲液一同提供。此外这些预混液还有Quick-Load 的形式,可用于直接凝胶上样。关于OneTaqRT-PCR 试剂盒或 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒的详细信息见 93 页。

浓度

5,000 units/ml。

OneTaq 缓冲液选择指南

OneTaq® 2X 预混液(提供标准缓冲液)                 货   号                  #M0482L

Q5® 血源直扩 2X 预混液 货 号 #M0500L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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500 reactions
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产品特点

· 无需 DNA 纯化,可直接使用人全血细胞或干血斑样品进行扩增

· 通过 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶进行精准、高效的 PCR
· 优化的缓冲液系统有效提高对扩增抑制成分和化学品的耐受度
· 适配体抑制酶活,为室温下建立反应体系奠定基础
 

产品信息

 Q5® 血源直扩 2X 预混液可以免除 DNA 纯化步骤,直接使用干血斑或含高达 30% 的全血样品进行各种靶标扩增。该预混液包含 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶,该酶热稳定性好,具有 3′→ 5′ 外切酶活性,融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d DNA 结合域,优化的 dNTP 缓冲液有效提高了对血液中扩增抑制成分、抗凝剂以及滤纸上化学品的耐受度。该产品能够从含有 EDTA 钠盐、EDTA 钾盐、枸橼酸钠和肝素钠的全血细胞以及从保存在普通防腐滤纸上的血样品中扩增长达 7.5 kb 的片段。 

Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶扩增性能卓越、保真度高。通过核酸适配体抑制酶活,可在室温条件下建立反应体系。
 
建议使用 NEB’s Tm Calculator 针对于感兴趣的聚合酶/缓冲液确认引物的最适退火温度,与其它 Tm 值估算系统不同,NEB Tm 值估算系统在估算最佳退火温度时,考虑了影响退火温度的缓冲液组分。
 
图 1:Q5® 血源直扩 2X 预混液扩增性能卓越,能够直接扩增全血或干血斑
 
Q5® 血源直扩 2X 预混液            货   号                  #M0500L

根据说明书推荐的标准反应条件,使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液进行 35 个循环的 PCR 扩增。使用 LabChip® 微流控分析仪对产率和纯度进行定量,结果分别以圆点的大小和颜色展示:圆点面积越大、绿色越深,则表示扩增性能越强。 A. 以 10% EDTA 保存的人全血为模板,扩增人基因组不同靶标(0.3 至 7.5 kb)。结果以模拟胶图(上)和相应的点图(下)呈现。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液在较大范围的模板长度区间内均表现良好。B. 以全血(上)或滤纸干血(底部)为模板,对人类基因组靶标(604 bp)进行扩增。人全血占总反应体积 (50 µl) 的 5-30%。将未经处理的 1 mm 打孔干血斑直接添加到 25 µl 反应体系中(每个反应一个打孔样品)。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液对不同的全血含量、防腐剂和各种类型的采血卡纸具有广泛的耐受性。
 
图 2:Q5® 血源直扩 2X 预混液对各种靶标序列均能高效扩增
 
Q5® 血源直扩 2X 预混液            货   号                  #M0500L
使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液和其它几种市售血液直扩聚合酶,分别对不同 GC 含量 (23-77%)(A图)和不同长度(2 -7 kb)(B 图)人类基因靶标进行 PCR。以 10% EDTA 保存的人全血为模板。根据说明书建议使用 50 µl 反应体系进行热循环。使用 LabChip® 微流控分析仪进行定量,结果分别以圆点的大小和颜色表示产量和纯度。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液对于各种类型的靶标均表现优异。
 
图 3:在各种滤纸,血液防腐剂、反应体系中表现稳定

Q5® 血源直扩 2X 预混液            货   号                  #M0500L
根据说明书推荐的标准反应条件,使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液对干血中的人类基因组靶标(604 bp)进行 PCR。将不同抗凝剂抗凝的血样采集于 Whatman 903 或 FTA Elute 卡纸上,在上述干血卡纸打孔,分别直接加入到 20、25 或 50 μl 反应体系中。结果显示:在各种体积的反应体系、抗凝剂或滤纸类型中,均能达到稳健扩增。
 

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物) 货 号 #E3025L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

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#E3025L
100 rxn
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25 rxn
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产品特点

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)是经过优化的 5X 预混液,包含除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。
·该 5X 预混液提供 Luna 反转录酶、dNTP 和小鼠 RNase 抑制剂。
·不含引物剂型可让用户更灵活的选择引物,以达到 cDNA 合成最佳效果
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成
·可用于第一链 cDNA 合成、两步法 RT-qPCR、两步法 RT-PCR以及 RNA-seq
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料,有助于减少加样错误
·提供 No-RT 对照预混液,增加实验可信度

产品说明

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)包含经过优化后的 5X 预混液,以及除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶,可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂(保护模板 RNA 免受降解)和 dNTP。此外,组分中的蓝色示踪染料可为反转录和下游应用提供可视化示踪。
 
该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容,让 cDNA 合成更灵活。LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)合成的 cDNA 产物可用于多种下游应用。在实时定量 PCR 中,建议使用混有随机引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。与 LunaScript SuperMix 反转录试剂盒(NEB #E3010)一样,无论是 1 μg 总 RNA 还是低拷贝 RNA,该预混液均能提供稳健、线性和灵敏的检测。如需合成长片段或全长 cDNA,则建议使用 oligo dT 引物。仅需 55℃ 孵育 10 分钟,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)即可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。试剂盒还提供 No-RT 对照预混液,可快速建立对照反应体系。
 
图 1:三种 cDNA 合成试剂的区别:Supermix、预混液、cDNA 合成试剂盒
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L
图 2:LunaScript 第一链 cDNA 合成时间最短,仅需 13 分钟
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L
比较不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript SuperMix 反转录试剂盒和 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)所需反应时间最短,并可以耐受高温,降低 RNA 复杂二级结构的影响。
 
图 3:LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)支持多种下游应用
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L
通过使用不同的引物(例如:随机引物混合液、d(T))23VN 引物或随机六聚体引物),LunaScript 反转录预混液试剂盒合成的 cDNA可适于不同下游应用(例如:RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq)。
 
 
图 4:在两步法 RT-qPCR 定量中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)功效稳健
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L
 A.使用随机引物混合液(NEB #S1330)和 LunaScript 反转录预混液(无引物)对1 µg 至 100 pg RNA 进行反转录,并进行两步法 RT-qPCR 检测,结果显示:与 LunaScript (NEB #E3010)一致,合成 cDNA 产量均展现出良好的线性度。
B.对于常规转录本,使用 d(T)23VN 引物获得的 cDNA 覆盖度与随机引物混合液一致。但对于长转录本(例如:SMG1),随机引物混合液能更好地覆盖靶基因 5´端,右下角图框所示:RT-qPCR 的靶基因位于 SMG1(16 kb)转录本的 5´端;与随机引物混合液(随机六聚体引物和 dT 锚定引物的混合物)相比,单独使用 dT 锚定引物(d(T)23VN)的 Cq 值延迟
 
图 5:在两步法 RT-qPCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)性能更优异
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L
A.根据各厂商产品说明书,使用几种市售第一链 cDNA 合成试剂盒将 1 μg–100 pg 人总 RNA 反转录成 cDNA,引物为随产品提供的随机引物。通过 8 个靶基因(丰度、长度和 GC 含
量不同)的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液(NEB# M3004)对 cDNA 产物进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示靶基因扩增表现(效率=90-110%,ΔCq≥3)。关于该可视化分析方法的详细信息,请在NEB 官网搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B.根据上述 4 个靶基因(两个经典内参基因和两个其它基因)的 Cq 值和上样量绘制曲线,结果显示:与其它商品化试剂盒相比,LunaScript 的 Cq 值最低。
 
 
图 6:在常规 PCR 或高保真 PCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)能够合成不同长度范围 cDNA
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  #E3025L

 使用 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)将 1 μg Jurkat 总 RNA 反转录成 cDNA,引物为 d(T))23VN,使用标准反应条件 55℃ 孵育 10 分钟,95℃ 孵育 1 分钟。之后使用不同 PCR 扩增试剂对 cDNA 产物进行检测。对于 5 kb以内的常规应用,建议使用 OneTaq 2X 预混液(NEB #M0482);对于高保真扩增,建议使用 Q5 热启动超保真 2X 预混液(NEB #M0494);对于长片段高产量扩增,建议使用 LongAmp Taq 2X 预混液(NEB #M0287)(数据未显示)

平末端/TA 连接酶预混液 货 号 #M0367L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

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平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L

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#M0367L
250 次反应
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50 次反应
1,219.00

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特性

 连接平末端
 T/A 克隆
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库
 连接粘性末端 

概述

平末端/TA 连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液,内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为提高平末端和单碱基突出末端的连接和转化效率而设计,并简化了建立反应所需步骤,优化了酶和缓冲液的最佳比例,以确保稳定、高效的连接,室温下即可快速连接所有末端类型的 DNA。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态,所以使用时无需解冻。此外,即使当 DNA 量少且浓度低时仍可进行亚克隆连接,为用户节约宝贵的 DNA 样品,且无需稀释直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

在 10 μl 的反应体系中加入 1X 平末端/TA 连接酶预混液和 DNA 底物,25℃ 温育。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。 

质保声明

该产品经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时,反复冻融 20 次后,检测反应效率无明显变化。 

OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液) 货 号 #M0484L-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 常规 PCR

OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                              收藏

OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L

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#M0484L
500 次反应(50 μl 反应体系)
3,249.00

#M0484S
100 次反应(50 μl 反应体系)
719.00

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OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L

概述

合酶与 Deep Vent DNA 聚合酶的混合物,可用于常规与复杂的 PCR 实验。Deep Vent DNA 聚合酶的 3´→5´ 外切酶活性提升了 Taq DNA 聚合酶的保真性和聚合能力。OneTaq 反应缓冲液与 High GC Enhancer的组合使得无论模板的 GC 含量高低,都只需最小的优化即能获得最高的产量。

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与 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶一同提供的有标准反应缓冲液、GC 反应缓冲液和 High GC Enhancer。
根据模板的 GC 含量选择缓冲液的建议见下文。

其它剂型

OneTaq 热启动 DNA 聚合酶均有预混液剂型。预混液有标准或 GC 缓冲液可供选择,High GC Enhancer 随 GC 缓冲液一同提供。此外这些预混液还有Quick-Load 的形式,可用于直接凝胶上样。关于OneTaqRT-PCR 试剂盒或 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒的详细信息见 93 页。

浓度

5,000 units/ml。

OneTaq 缓冲液选择指南

OneTaq® 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液)                  货   号                  #M0484L