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品牌：Enzo
CAS No.： 储存条件：-80℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ENZ-51011 |
– | 1 Kit | – | 3,080.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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品牌：Enzo
CAS No.： 储存条件：-80℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ENZ-51010 |
– | 1 Kit | – | 4,610.00 | – | – |
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品牌：Wako
CAS No.：143556-24-5 储存条件：-20℃ 纯度：90.0+% (HPLC) |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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120-04891 |
for Biochemistry | 100 mg | – | 1,820.00 | – | – |
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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 L-012 是一种高灵敏度的化学发光(CHL) 探针，比鲁米诺(Luminol)
试剂更有效。L-012 与多种类型的活性氧反应，这些活性氧来自人血液和口腔中激活的中性粒细胞或者大鼠腹膜腔。该产品可以用于有辣根过氧化物酶的ELISA 试剂盒，可提高反应灵敏度。
溶解及保存：蒸馏水溶解成20mM/L（6.23mg/mL）的水溶液，再用50mM/L的Tris盐酸缓冲液（pH7.5）稀释至最终浓度为500μM/L。另外，在无细胞系时，最终浓度5~50μM/L使用。原液冷冻保存，使用时再溶解。
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氧化应激与自由基
品名货号用途
| 抗氧化能力检测试剂盒 (DPPH法 ) | D678 | 抗氧化能力检测 |
| 超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit | S311 | 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST |
细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。
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特点：
● 比DCFH-DA更高的灵敏度
● 可多种仪器上机
试剂盒内含
产品概述
ROS Reactive Oxygen Species 主要是在线粒体中合成 ATP时所产生的高活性氧簇。ROS对细胞内的信号传导和吞噬作用等免疫机能起着重要的作用。另一方面， ROS对DNA和蛋白质的氧化作用也是各种疾病和细胞衰老的原因之一。
最近的研究发现，由二价铁所诱发的芬顿反应所引起的一种新的细胞死亡方式（铁死亡，Ferroptosis）的研究领域里 ROS也被广泛关注，检测 ROS的需求和意义也在不断升高 1)。目前在检测 ROS时，使用最多的试剂是DCFH-DA。但是 DCFH-DA往往有灵敏度低、样品荧光与背景的差别不明显等问题 。本试剂盒是一种高灵敏度的ROS检测试剂盒，而且配套使用本试剂盒内附带的 Buffer，可以在相对更低的细胞毒性下对 ROS进行高灵敏度检测。
荧光特性
技术信息
与市面现有试剂的比较
高灵敏度DCFH-DA与常规DCFH-DA对活性氧（ROS）的反应性相同。
另外，由于具有与DCFH-DA相同的荧光特性（λex：505nm，λem：525nm），因此能够以相同的激发/荧光波长进行检测。
用DCFH-DA和ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA-分别对过氧化氢（1×10 4细胞/ ml）处理的HeLa细胞进行染色，并比较细胞内ROS的荧光结果。结果显示，在任何检测仪器中，同仁化学ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA都以比DCFH-DA拥有更高的灵敏度。
（1）荧光显微镜检测
<检测条件>
Ex.488 nm / Em.500 -560 nm
细胞种类：HeLa细胞
（2）使用荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex.490-520 nm / Em.510-540 nm
细胞种类：HeLa细胞
（3）使用流式细胞仪检测
<检测条件>
FITC激发电压：215 V
细胞种类：HeLa细胞
实验例
一.Erastin处理的A549细胞的内在性ROS的检测
1. 向 ibidi 8-well plate中接种A549细胞 (1××104 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-37°C 、 5% CO2培养箱内过夜培养 。
2. 去除培养基，加入用 DMEM培养基 稀释好的 50 μμmol/l的 Erastin溶液， 37°C 、 5% CO2培养箱过夜培养 。
3. 去除上清，HBSS清洗 2次 ，加入 Highly Sensitive DCFH-DA Dye working solution 37°C 、 5% CO2培养箱培养 30 min。
4. 去除Working solution HBSS清洗 2次 ，再次加入 HBSS，用荧光显微镜观察。
二.LPS处理的巨噬细胞内源性ROS的检测
用LPS（脂多糖）处理的RAW264.7细胞中细胞内ROS的变化的荧光成像结果显示，LPS处理可增加细胞内ROS。
<检测条件>
细胞内ROS（高灵敏度DCFH-DA染料）：Ex. 488 nm / Em.500 -560 nm
<实验操作>
1.在ibidi 8孔板中接种RAW264.7细胞（3×104细胞，DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素）
2.培养箱（37℃，5％）过夜培养
3.除去培养基，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加用DMEM培养基稀释的500 ng / ml LPS
4.培养箱（37°C，5％CO2） 孵育20小时
5.除去上清液，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加高灵敏度DCFH-DA染料工作液。
6.培养箱（37°C，5％CO2）培养30分钟
7.培养30分钟后除去工作溶，用HBSS洗涤细胞两次后再添加HBSS并用荧光显微镜观察。
三.柳氮磺吡啶(SSZ)引起的细胞内代谢变化
向A549细胞添加已知抑制胱氨酸/谷氨酸转运蛋白（xCT）的柳氮磺吡啶（SSZ）之后，确认了细胞内的ROS、ATP、α-谷氨酸（α-KG）、谷胱甘肽（GSH）的变化和谷氨酸释放量的变化。
结果显示，由于SSZ的添加，细胞内的ATP、谷胱甘肽（GSH）以及谷氨酸的释放量减少，细胞内的α-谷氨酸和ROS增加。
参考文献
1、S. Kato, “Effects of platinum‑coexisting dopamine with X‑ray irradiation upon human glioblastoma cell proliferation”, Hum. Cell, 2021, doi:10.1007/s13577-021-00591-3.
2、K. Kanno, T. Sakaue, M. Hamaguchi, K. Namiguchi, D. Nanba, J. Aono, M. Kurata, J. Masumoto, S. Higashiyama, H. Izutani, “Hypoxic Culture Maintains Cell Growth of the Primary Human Valve Interstitial Cells with Stemness”, Int. J. Mol. Sci. 2021, doi:10.3390/ijms221910534.
3、C. Fang, L. Wu, M. Zhao, T. Deng, J. Gu, X. Guo, C. Li, W. Li, X. Zeng, “Periodontitis Exacerbates Benign Prostatic Hyperplasia through Regulation of Oxidative Stress and Inflammation”, Oxid. Med. Cell. Longevity, 2021, doi:10.1155/2021/2094665.
4、M. Tmoi and S. Shigeoka, “CP12 Is Involved in Protection against High Light Intensity by Suppressing the ROS Generation in Synechococcus elongatus PCC7942”, Plants, 2021, doi:10.3390/plants10071432.
5、S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, “In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling”, Gene, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.
6、Z. Luo, Q. Gao, H. Zhang, Y. Zhang, S. Zhou, J. Zhang, W. Xu, J. Xu, ” Microbe-derived antioxidants attenuate cobalt chloride-induced mitochondrial function, autophagy and BNIP3-dependent mitophagy pathways in BRL3A cells”, 2022, doi:10.1016/j.ecoenv.2022.113219.
7、Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.
8、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, 2022, Exp. Gerontol., doi:10.1016/j.exger.2022.111866.
9、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”，2023, Advanced Science, doi：10.1002/advs.202302136
10、Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097
常见问题Q&A
| Q1: 请告诉我一个试剂盒可以测多少个样品？ |
| A1:可以测量的样品数量请参考以下内容。 ・96-well plate：1块 ・ibidi8-well plate：6块 ・35mm dish：5块 ・6-well plate：5孔 |
| Q2:有没有可以用作阳性对照的实验例？ |
| A2：使用说明书上记载了经过过氧化氢处理的HeLa细胞的检测实验例。 |
| Q3: Highly Sensitive DCFH-DA working solution可以用Loading Buffer以外的溶液配置吗? |
| A3:为了减轻染色时对细胞的损伤，推荐使用附带的Loading Buffer配置，Hanks’HEPES和HBSS也可以进行制备。如果用培养基进行制备时请使用无血清培养基。 |
| Q4:染色后的清洗可以使用PBS代替HBSS吗？ |
| A4：为了减轻对细胞的损伤推荐HBSS。如果手头没有HBSS的话，建议用培养基清洗。 |
| Q5:用荧光显微镜检测时有什么注意事项吗？ |
| A5：染料与ROS反应并氧化后发出荧光。如果激发光持续照射，则染料会被氧化，背景会上升，因此，在获取荧光成像图像时，请先调整明场环境下的焦点和参数，然后再获取荧光图像。 |
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