封闭用脱脂奶粉的常见问题-技术文章

封闭用脱脂奶粉的常见问题

脱脂奶粉可用于制备微生物培养基;配制ELISA、western等实验的封闭液。western blot经过转印以后,膜上有了蛋白,但是还有很多地方是没有蛋白覆盖的,通过脱脂奶粉的蛋白孵育后,这些空白的膜都被脱脂奶粉的蛋白覆盖了,就防止后续孵育的一抗和二抗与印迹膜的非特异结合。在科研实验中,脱脂奶粉也是常用的生化试剂之一。

关于脱脂奶粉和BSA作为封闭剂的一些问题

问:western blot中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么?

答:脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原?的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。

问:请问封闭液和抗体稀释液用BSA?和脱脂奶粉有什么区别呢?

答:所谓封闭是用以减少或消除载体上的非特异性结合蛋白的分子,一般是脱脂奶粉或BSA。对WesterBlot来说两者均为常用封闭剂。脱脂奶粉的成份远较BSA复杂,如果要做ELISA或者phage display时候,我们还是用BSA。我推测也没有依据说脱脂奶粉就绝对不能用,注意的是各种品牌的脱脂奶粉中残留的脂质量不同, 脂质是会影响实验结果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑选。

问:封闭的时候,为什么一定要用脱脂奶粉?

答:膜上有蛋白缺损点,不用蛋白封蛋白缺损点容易出现非特异染色。也可用BSA封,效果并不比脱脂奶粉好。

问:western封闭为什么用脱脂牛奶,不用全脂的?

答:是因为如果含有脂肪的话,乳脂会与奶粉中的蛋白结合,导致封闭的时候蛋白浓度下降,影响封闭的效果,有可能造成封闭不完全,所以都会用脱脂的奶粉来做。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商,专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、试剂盒、实验耗材等产品。脱脂奶粉为上海金畔生物科技有限公司常备货产品,常用作配置封闭液,细胞培养等试验中。

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