L-谷氨酰胺的作用

L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分，细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少L-谷氨酰胺时,细胞生长不良。

L-谷氨酰胺的作用

L-谷氨酰胺在食品加工中作营养增补剂，调香增补剂。L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质的重要原材料，在细胞培养中，谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。在配制多数细胞培养液时都需补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故应单独配制，置于-20℃ 冰箱中保存，用前加入培养液中。加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新补加谷氨酰胺。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。L-谷氨酰胺是上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其货号为，G0200。L-谷氨酰胺在中性溶液中稳定，在醇、碱或热水中易分解成谷氨醇或丙酯化为吡咯羧醇，无臭，有微甜味。可用于营养增补剂，调味增香剂。医药上用作治疗消化器官溃疡、醇中毒及改善脑功能。L-谷氨酰胺是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一。上海金畔生物科技有限公司生产的谷氨酰胺溶液浓度为200mM，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养等用途，使用前不必再进行过滤除菌等处理。

酚红的介绍及使用说明

酚红是一种深红色结晶性粉末，几乎不溶于醚和氯仿，溶于氢氧化碱或碳酸碱溶液中呈深红色，在空气中稳定。CAS号：143-74-8。

酚红的作用：

酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,但是酚红具有一定的固醇类激素样作用,如雌激素样作用,尤其对于所培养的哺乳类动物细胞,可能发生的固醇类反应不可忽视。

苯酚红被用作酸碱指示剂。一种苯酚红溶液，在6.4个或一个值为一个下面和一个红色的颜色在8.2和以上。酚红在培养基中被广泛使用，以确定从中性到酸性PH值的变化。它是通常用在细胞培养基中，在11毫克/ L的苯酚红在组织培养基中可以作为一个弱雌激素，特别是与人乳腺癌细胞，脂溶性杂质，而不是苯酚红染料本身，对于雌激素活性的帐户。95-99%的这些杂质可以从钠去除酚红与雌激素样活性降低。

溶液的配制方法：

取0.1 g苯酚红与5.7 mL 0.05 mol/L的NaOH溶液在研钵中研匀后用纯水溶解制成250 mL试液。

储存/稳定性：

酚红作为一个组件的组织培养基中可蒸压。

准备指令：

苯酚红是微溶于水（3毫克/毫升）和酒精（4毫克/毫升）。酚红容易溶于碱金属氢氧化物或碳酸盐与红色溶液的形成。苯酚红钠盐溶于水（25毫克/毫升）。本品为可溶性（1毫克/毫升），在1的氢氧化钠。

程序：

指示溶液可以溶解0.1克酚红14.20毫升0.02 N NaOH和形成稀释至250 mL去离子水。苯酚红可以用来测量巨噬细胞培养上清中的过氧化氢多孔板，实验使用2个单位的过氧化物酶/量100毫升0.5毫米酚红，pH 737°C.反应停止而开发的颜色加入10毫升1 N NaOH和阅读的氧化苯酚红600-610 nm的吸收。计算完成的比较过氧化氢标准曲线。

注意事项及免责声明：

实验室使用。不为药物，家庭或其他用途。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品。酚红为上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其货号为P8460。酚红多工作细胞培养物，用于细胞培养的应用。

DEAE-Sephadex A-50纯化血清中的γ球蛋白

产品简介

DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85-7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2-7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex?A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。

产品参数

产品名称：DEAE-Sephadex A-50

货号：17-0180-02

基质：Sephadex

颗粒大小：40-120μm

最大流速：45cm/h

工作pH：2-9

操作温度：室温

保存条件：室温

实验步骤

1、预处理

称DEAE-SephadexA-50(下称A-50)5克，悬于500ml蒸馏水，1小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5M NaOH15ml的比例，将A-50浸泡于0.5MNaOH中，搅匀，静置30分钟，装入布氏漏斗(垫有2层滤纸)中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性；再以0.5MHCl同上操作过程处理，最后以0.5M?NaOH再处理一次。处理完后，将A-50浸泡于0.1M，PH7.4?PB中过夜。

2、装柱

(1)将层析柱垂直固定于滴定铁架上，柱底垫一园尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。

(2)将0.1M，PH7.4?PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的A-50。待A-50凝胶沉降2-3cm厚时，启开出水口螺旋夹，控制流速1ml/分钟，同时连续倒入糊状A-50凝胶至所需高度。

(3)关闭出水口，待A-50凝胶完全沉降后，柱面放一园形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口，通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。

3、平衡

启开出水口螺旋夹，控制流速12-14滴/分钟，使约2倍床体积的洗脱液流出。并以PH计与电导仪分别测定洗脱液及流出液之PH值与离子强度是否相同。达到一致时关闭出水口，停止平衡。

4、加样及洗脱

启开上口橡皮塞及下口螺旋夹，使柱中液体缓慢滴出，当柱面液体与柱面相切时，立即关闭出水口，以毛细滴管沿柱壁加入样品(体积应<床体积的2％，蛋白浓度以<100mg为宜)。松开出水口螺旋夹使柱面样品缓慢进入柱内，至与柱面相切时，立即关闭下口，以少量洗脱液洗柱壁2-3次；再放开出水口，使洗液进入床柱，随后立即于柱面上加入数ml洗脱液，紧塞柱上口，使整个洗脱过程成一密闭系统。并控制流速12～14滴／分钟。

5、收集

开始洗脱的同时就以试管进行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。

6、测蛋白

以751-G型紫外分光光度计分别测定每管OD280nm，与OD260nm，按前述公式计算各管蛋白含量。并以OD280nm为纵座标，以试管编号为横座标，绘制洗脱曲线。

7、合并、浓缩

将洗脱峰的上坡段与下坡段各管收集液分别进行合并，以PEG(MW6000)洗缩至所需体积，加入0.02％NaN３防腐剂，于4℃保存备用。

8、A-50凝胶的再生

在柱上先以2MNaCl洗柱上的杂蛋白至流出液的OD280nm<0.02，再以蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将A-50再处理一遍即达再生。近期用时泡于洗脱缓冲液中４℃保存；近期不用时，以无水酒精洗2次，再置50℃温箱烘干，装瓶内保存。

(四)注意事项

1.柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就得获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低。柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。

2.纯化过程必须严格控制脱缓冲液的PH及离子强度。样品与A-50凝胶必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。

3.所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

5.样的体积要小，浓度不宜过高。

6.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

丙酮酸钠的应用

丙酮酸钠是糖酵解观察中的中间产物，是细胞代谢所需的营养成分，可以直接进出细胞。添加到培养液中即为细胞提供能量，又是合成代谢所需的碳源。

丙酮酸钠应用：

有些类型的细胞需要添加丙酮酸钠，降低血清浓度时也可添加，进行克隆培养时可添加。丙酮酸钠还有助于降低荧光物质引发的光毒作用。丙酮酸钠使用浓度通常是1mmol/L。

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