测序级重组胰蛋白酶MTrypsin

◆概述

胰蛋白酶(Trypsin; EC 3.4.21.4)是一种丝氨酸蛋白酶，酶解赖氨酸及精氨酸C末端形成的肽键。重组猪胰蛋白酶是由重组毕赤酵母表达并采用层析色谱法纯化获得，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。未经修饰的胰蛋白酶自切降解肽段，可能对蛋白质测序及液质联用质量肽图检测造成干扰，自切降解会造成消化样品过程中酶活性降低，且被证明可能产生胰糜蛋白酶活性。本品为重组表达胰蛋白酶，多步纯化无杂酶活性；经还原甲基化修饰，在蛋白组学及质量肽图研究中，对单独酶切或与Lys-C分步/混合酶切时，对蛋白酶水解具有抵抗力，从而保证其活性高稳定性好。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如TLCK、PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。

◆特点

●  优良的稳定性：0.1 mg/mL测序级胰蛋白酶MTP，于50 mmol NH₄HCO₃酶切缓冲中37℃水浴反应过夜（15 h），酶活保留超过90%。

●  良好的特异性：利用测序级胰蛋白酶MTP，1:50(w/w)酶切人胰岛素B链，RP-HPLC于214 nm波长检测酶切产物，酶切16 h产物与2 h产物相比，产物肽峰比例增加而个数为2个且不随时间延长增加。

◆特性

性状    白色或类白色冻干粉

纯度    ≥95%

相对分子量    23 kDa±2.3 kDa

酶比活性    ≥3800 USP/mg 

◆来源

由重组毕赤酵母表达并采用层析色谱法纯化获得，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。 

◆稳定性

酶稳定性对比研究

考察样品均为RTP冻干粉或MTP冻干粉用10 mmol/L HCl或50 mmol/L NH₄HCO₃溶解的酶溶液（含量为0.1 mg/mL）。

◆使用方法

溶解缓冲：10 mmol/L HCl或CH₃COOH，20 mmol/L CaCl₂；溶解后分装-15℃以下保存。

酶切缓冲：50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH₄HCO₃，1 mmol/L CaCl₂，pH 7.6~8.0；

推荐条件：50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH₄HCO₃，1 mmol/L CaCl₂酶切缓冲中，1:20~1:100比例与待消化蛋白(含量0.5~1.0 mg/mL)混合，30~37℃进行酶切反应；经变性处理的蛋白，尿素或盐酸胍建议稀释至1 mol/L以下。

◆应用实例

MTP与RTP用于酶切质量肽图对比

	获取质谱分子量肽峰个数	备注
MTP（黑色)	13	1:50酶切15 h
RTP（蓝色）	9

◆保存条件

储存稳定性：冻干粉存于-15℃以下，24个月稳定；HCl或CH₃COOH溶解后，分装冻存于-15℃以下。

运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。