辛基-琼脂糖凝胶CL-4B的使用方法及注意事项

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B产品简介

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B 是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物，含有疏水性正辛基。具有较好的流速，在配基和骨架间的键很稳定，可反复在pH7.0、120°C热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白。

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B产品参数

产品名称：辛基-琼脂糖凝胶CL-4B(Octyl- Sepharose CL-4B)

货号：S9300

基质：4%琼脂糖凝胶

配基：正丁烷基n-Octyl

配基密度： 40μmol/mL

颗粒大小：45-165μm

最大流速：50cm/h

每毫升结合量：15-20mgHSA

操作温度：室温

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B使用方法

1.装柱

将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。

根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。

将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上样

样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；

一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强，介质对组分吸附越牢。

4.洗脱

疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS

5.再生

一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6.在位清洗

对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M  NaCl去除。

对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质，可用1M  NaOH去除。

对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。

7.去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5-6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%的乙醇；

（2） 2倍柱体积50Mm Tris-HcL Ph7.5

（3）1倍柱体积4M尿素

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M  NaCl;

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

8.消毒

用0.5-1.0 M NaOH 室温下洗8-10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项

（1）密封贮存于4°C-28°C（保存溶液为20%乙醇+0.1 M醋酸钠），通风、干燥的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存于4°C（20%乙醇）。

（2）在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

赤霉素的性质及使用方法

赤霉素又称“920”，由四环骨架衍生而得，常用作植物激素，能促进茎、叶的生长，提早抽苔开花，促进种子、块茎、块根发芽，刺激果实生长,增加结果率或形成无籽果实等。

赤霉素的性质：

熔点 ：227 °C

比旋光度：82.5 º (c=10, ethanol)

折射率：81 ° (C=2, MeOH)

储存条件 ：0-6°C

水溶解性：5 g/L (20 º C)

Merck ：14,4419

BRN ：54346

稳定性：Stable. Combustible. Incompatible with acids, strong oxidizing agents.

NIST化学物质信息：Gibberellic acid(77-06-5)

赤霉素的使用方法：

1、提高杂交稻产量，杂交稻在生产中存在着10公分左右的包颈，导致抽穗不完全，无法授粉，从而降低结实率，影响产量。对此，应用赤霉素能有效地解决这些问题，方法是每亩用赤霉素10—15克，分2—3次喷洒。第一次喷药为抽穗10%时，每亩用2—3克；第二次在次日喷，每亩用量为4—6克，第三次在第二次的次日或隔天喷，每亩用量为4—6克。 

2、促进蔬菜生长：许多蔬菜如芹菜、菠菜、荠菜、茼蒿等均可使用赤霉素，以促进营养体生长，增加产量以及提早收获。 

3、打破马铃薯休眠：用0.5—4ppm浓度赤霉素浸切块的薯块10—15分钟，休眠期短的品种浓度低些，休眠期长的品种浓度高些，浸泡后的种薯，捞出放在阴凉处晾干，切勿在阳光下暴晒，之后即可播种。从而可打破休眠，促进芽萌发，使出苗早而齐。 

4、促进草莓开花：保护地栽培草莓，于初蕾期喷10ppm赤霉素，每株5毫升，可避免休眠，促进开花结果。

D-山梨醇的作用

                                                                                                D-山梨醇的作用

上海金畔生物科技有限公司福林酚的制备及应用

 福林酚的制备：

向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及l00mL浓盐酸，充分混合后，接上回流冷凝管，以小火回流10小时，结束后再加入150g的硫酸锂(Li2SO4)、50mL去离子水及数滴液溴，再继续沸腾15分钟，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。

福林酚的原理：

蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物，蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照，而确定蛋白质含量。试剂中的 W6+在碱性条件下，与体系中存在的酚羟基发生反应，得到呈现蓝色的W5+。

福林酚的应用：

福林酚适用于对体系中存在酚羟基化合物其含量的比色法、分光光度法。用于蛋白质含量的测定，蛋白的颜色反应，浓度的测定.蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)与福林酚反应，生成深蓝色复合物，蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。

福林酚的操作方法：

1、标准曲线的制作：   取14支试管分成两组，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL标准蛋白质溶液(250μg/mL)，用水补足到1mL，加入5mL试剂甲，混匀，于20-25℃放置10分钟，再加入0.5mL试剂乙，立即摇匀，在20-25℃保温30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值，取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线值为定量的依据。

2、样品测定：    取1mL样品溶液（约合20-250μg/多肽或蛋白质）加入5mL试剂甲混匀，于20-25℃放置10分钟，再加0.5mL试剂乙（Folin-酚），立即摇匀，在20-25℃保温30分钟，然后于500nm处比色，以1mL水代替样品作空白对照。测定后，可以在标准曲线中查出未知样品的浓度。若用0.5cm光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2mL样品溶液（约含5-100μg多肽或蛋白质）加入1mL试剂甲（可选用0.3-0.5cm直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1mL试剂乙 ，立即混匀，30分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质的浓度在2-25μg，测波长755nm,，而25μg以上则采用500nm比色为宜。

使用福林酚的注意事项：

1、FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。

2、福林酚仅在酸性条件下稳定，所以加入试剂乙后要立即混匀，在试剂乙被破坏之前完成反应，否则显色程度减弱。用该方法测定蛋白浓度会受到蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。

上海金畔生物科技有限公司是生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。福林酚为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其货号为F8060。

封片剂的使用方法

封片剂：一般是指在涉及载玻片和盖玻片的实验中需要用到的一种粘稠剂。方便标本样品的保存和信号的保留，具有隔绝空气的作用。一般我们用到的有普通封片剂和抗荧光淬灭的封片剂。下面以一个例子来讲讲吧。

就来讲讲组化最后的事吧–封片。这个实验中我们可以选择的封片较多，可以用中性树脂和甘油明胶等。那就以甘油明胶来说吧。

首先将甘油明胶加热融化。因为在常温情况下，甘油明胶是半凝固状的，浓稠的粘稠体，不利于盖玻片的使用。

接下来就是利用移液枪或者干净的玻璃棒吸取或者沾取甘油明胶滴在组织上，观察液体表面是否有小气泡，若有，则尽量用一个盖玻片占去；若无，就直接用盖玻片和载玻片成一定角度（边缘靠近液滴）慢慢的靠近液滴，让液体慢慢的赶出盖玻片和载玻片之间的空气。

最后，只要将封好的片子晾干即可。

这里面需要注意的就是避免气泡出现在组织中，若不小心有气泡了，也要将气泡赶出组织的范围，不能影响观察结果和样品的保存。