上海金畔生物科技有限公司福林酚的制备及应用

 福林酚的制备：

向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及l00mL浓盐酸，充分混合后，接上回流冷凝管，以小火回流10小时，结束后再加入150g的硫酸锂(Li2SO4)、50mL去离子水及数滴液溴，再继续沸腾15分钟，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。

福林酚的原理：

蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物，蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照，而确定蛋白质含量。试剂中的 W6+在碱性条件下，与体系中存在的酚羟基发生反应，得到呈现蓝色的W5+。

福林酚的应用：

福林酚适用于对体系中存在酚羟基化合物其含量的比色法、分光光度法。用于蛋白质含量的测定，蛋白的颜色反应，浓度的测定.蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)与福林酚反应，生成深蓝色复合物，蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。

福林酚的操作方法：

1、标准曲线的制作：   取14支试管分成两组，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL标准蛋白质溶液(250μg/mL)，用水补足到1mL，加入5mL试剂甲，混匀，于20-25℃放置10分钟，再加入0.5mL试剂乙，立即摇匀，在20-25℃保温30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值，取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线值为定量的依据。

2、样品测定：    取1mL样品溶液（约合20-250μg/多肽或蛋白质）加入5mL试剂甲混匀，于20-25℃放置10分钟，再加0.5mL试剂乙（Folin-酚），立即摇匀，在20-25℃保温30分钟，然后于500nm处比色，以1mL水代替样品作空白对照。测定后，可以在标准曲线中查出未知样品的浓度。若用0.5cm光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2mL样品溶液（约含5-100μg多肽或蛋白质）加入1mL试剂甲（可选用0.3-0.5cm直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1mL试剂乙 ，立即混匀，30分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质的浓度在2-25μg，测波长755nm,，而25μg以上则采用500nm比色为宜。

使用福林酚的注意事项：

1、FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。

2、福林酚仅在酸性条件下稳定，所以加入试剂乙后要立即混匀，在试剂乙被破坏之前完成反应，否则显色程度减弱。用该方法测定蛋白浓度会受到蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。

上海金畔生物科技有限公司是生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。福林酚为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其货号为F8060。