辛基-琼脂糖凝胶CL-4B的使用方法及注意事项

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B产品简介

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B 是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物，含有疏水性正辛基。具有较好的流速，在配基和骨架间的键很稳定，可反复在pH7.0、120°C热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白。

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B产品参数

产品名称：辛基-琼脂糖凝胶CL-4B(Octyl- Sepharose CL-4B)

货号：S9300

基质：4%琼脂糖凝胶

配基：正丁烷基n-Octyl

配基密度： 40μmol/mL

颗粒大小：45-165μm

最大流速：50cm/h

每毫升结合量：15-20mgHSA

操作温度：室温

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B使用方法

1.装柱

将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。

根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。

将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上样

样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；

一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强，介质对组分吸附越牢。

4.洗脱

疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS

5.再生

一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6.在位清洗

对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M  NaCl去除。

对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质，可用1M  NaOH去除。

对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。

7.去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5-6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%的乙醇；

（2） 2倍柱体积50Mm Tris-HcL Ph7.5

（3）1倍柱体积4M尿素

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M  NaCl;

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

8.消毒

用0.5-1.0 M NaOH 室温下洗8-10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项

（1）密封贮存于4°C-28°C（保存溶液为20%乙醇+0.1 M醋酸钠），通风、干燥的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存于4°C（20%乙醇）。

（2）在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。