蛋白浓度测定的方法具体有哪些？

蛋白质浓度测定是利用化学或物理方法测定蛋白质浓度，一般蛋白浓度测定的方法有很多种，每种方法都有优点和局限性，下面我们就具体看一下蛋白浓度测定的方法都有哪些。

蛋白浓度测定的方法：

1. 紫外分光光度法

紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法，不需要任何试剂，操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的，所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核酸对测定结果引起极大误差，其最大吸收在260nm。所以同时测定280及260nm两种波长的吸光度，通过计算可得较为正确的蛋白质含量。

2. 双缩脲法

利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠——亚硫酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开，这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法称为盐方法。盐析分离蛋白质的方法不仅用于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研究工作中，如一些特殊蛋白质—酶、蛋白激素等的分离和纯化。

蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应），且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此可于蛋白质的定量测定。

但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有—CH2—NH2等结构化合物，双缩脲反应也呈阳性。本实验用27.8％硫酸钠—亚硫酸钠溶液稀释血清，取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离，取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白之比即所谓的白／球比值。

3. Folin-酚试剂法

目前实验室较多用Folin-酚法测定蛋白质含量，此法的特点是灵敏度高，较双缩脲高两个数量级，较紫外法略高，操作稍微麻烦，反应约在15分钟有最大显色，并最少可稳定几个小时，其不足之处是干扰因素较多，有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。其原理是蛋白质中含有酚基的酪氨酸，可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物，颜色深浅与蛋白含量成正比。

4. 考马氏亮蓝G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料结合法测定蛋白质的优点是灵敏度较高，可检测到微量蛋白，操作简便、快迅，试剂配制极简单，重复性好，但干扰因素多。考马氏亮蓝G－250具有红色和青色两种色调、在酸性溶液中游离状度下为棕红色，当它通过疏水作用与蛋白质结合后，变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处，在一定的范围内，蛋白质含量与 595nm的吸光度成正比，测定595nm处光密度值的增加即可进行蛋白质的定量。

以上便是实验室中常见的几种蛋白浓度测定的方法，另外还有凯氏定氮法和BCA法，有凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，BCA法又以其试剂稳定，抗干扰能力较强，结果稳定，灵敏度高而受到欢迎。

概述酪蛋白和乳清蛋白的区别

酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质。牛奶的蛋白质，主要以酪蛋白(Casein)为主，人奶以白蛋白为主。酪蛋白是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳(curds)。
酪蛋白和乳清蛋白的区别
乳清蛋白中含有高浓度、比例恰当的必需氨基酸，还含有为新生儿必需的半胱氨酸。此外，乳清蛋白还含有包括免疫球蛋白和双歧因子等免疫因子。对于宝宝而言，乳清蛋白是一种优质蛋白，因为它容易被消化，蛋白质的生物利用度高，从而有效减轻肾脏负担。
酪蛋白中含有丰富的必需氨基酸，还含有婴儿特别需求的蛋氨酸、苯丙氨酸及酪氨酸。另外，酪蛋白中结合了重要的矿物元素，如钙、磷、铁、锌等。但是，酪蛋白是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳。过量的酪蛋白会产生较高的肾溶质负荷，给宝宝肾脏带来较重的负担，对宝宝是不安全的。
母乳中乳清蛋白和酪蛋白的比例为60 : 40
乳清蛋白和酪蛋白各有好处，但合适的比例还是应该以母乳作为黄金标准。母乳中乳清蛋白和酪蛋白的比例为60 : 40(而普通牛奶中乳清蛋白和酪蛋白的比例为18 : 82)。
酪蛋白的物化性质：
干酪素是等电点为pH4.8的两性蛋白质。在牛奶中以磷酸二钙、磷酸三钙或两者的复合物形式存在，构造极为复杂，直到现在没有完全确定的分子式，分子量大约为57000-375000。干酪素在牛奶中约含3%，约占牛奶蛋白质的80%。纯干酪素为白色、无味、无臭的粒状固体。相对密度约1.26。不溶于水和有机溶剂。干酪素能吸收水分，浸于水中，则迅速膨胀，但分子并不结合。
上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。酪蛋白为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其货号为C8200。咨询详情可致电：400-968-6088

苏木素复染的注意事项

苏木素复染要求比HE染色浅，30秒就够了，不要超过1分钟，染深了可以用1%盐酸酒精分色5-10秒，然后氨水返蓝。
苏木素复染时间不需要太长，当然这也要根据苏木精的质量来确定，但基本上不要超多一分钟。染色过深的话可以用酸性的水溶液（在水里滴加少量浓盐酸）分色，分色的另外一个目的是洗掉苏木精在细胞质中的非特异性结合，这样可以使细胞质中的特异信号更明显。所以不管复染是不是过度，分色这一步最好不要省掉。分色后记得再用氨水返蓝一下。
苏木素复染常见问题：
苏木素复染时间的把握？
（1）苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。
（2）盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。
（3）如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。
2、苏木素复染后氨水返蓝这一步如何做、浓度多少、时间多长?
答：返蓝可以用碱性溶液（PBS/NA2HPO4/淡氨水）或45度温水、冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。淡氨水有人用50ml自来水＋三四滴的氢氧化铵。
3、DAB显色时间如何把握？
（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；
（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；
（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；
（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。
苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化 时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

槲皮素的性质及应用领域总结

槲皮素属黄酮类化合物，存在于许多植物的花、叶、果实中，多以甙的形式存在，如芦丁(芸香甙)、槲皮甙、金丝桃甙等，经酸水解可得到槲皮素。槲皮素易溶于热乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。

槲皮素的性质：

1.其外观呈黄色针状结晶性粉末状。

2.对热稳定，分解温度314℃。能提高食品中色素的耐光性，防止食品香味的改变。遇金属离子会变色。

3.微溶于水，易溶于碱性水溶液。栎皮酮及其衍生物是广泛存在于各种蔬菜和水果中的一类黄酮化合物。如洋葱、沙棘、山楂、槐、茶叶等。

4.具有抗自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗过敏等作用。用于猪油等时，各种抗氧指标与BHA或PG相似。

5.因其2、3位间有双键，3′、4′处有2个羟基，具有能作为金属螯合作用或油脂等氧化过程中产生的游离基团接受体的功能，因而能作为抗坏血酸或油脂的抗氧化剂，有利尿作用。

槲皮素的应用：

1.抗氧化剂。主要用于油脂、饮料、冷饮、肉类加工制品。

2.一种天然染料。可用作介质染料。用于羊毛和棉，用铝盐得黄色，用铬盐得橄榄黄色，用锡盐得橙色，用铁盐得橄榄绿。耐皂洗很好，耐晒中等。

3M乙酸钠（pH=5.2）的作用原理

3M 乙酸钠（NaAc）又称醋酸钠。固体为无色透明结晶或白色颗粒。常温下为三水化合物，120度时失去结晶水，相对密度为：1.45（三水化合物）。分子量为136.08（三水化合物）；其中三水乙酸钠0 .1g可溶于0.8ml水，0.6ml沸水，19ml乙醇。
本产品为3M的乙酸钠溶液，pH为5.2。
3M 乙酸钠配制方法：
3 M 乙酸钠（pH=5.2）的配制：在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰醋酸调节pH值至5.2，加水定容至1L，分装后高压。
3M 乙酸钠的用途：
3M乙酸钠可用于测定铅、铜、镍和铁等，也是一种常用的缓冲剂。在核酸提取中，加入乙酸钠缓冲液，可调节盐离子的浓度，中和核酸分子的负电荷，便于加入乙醇后使DNA沉淀下来。
贮藏温度：常温保存。