湿润剂NP40的生物学应用

湿润剂NP40

英文名称： Nonylphenyl-poly-ethylene glycol ；NP40

湿润剂P40的性状：湿润剂NP40为液体，有吸湿性。在软水、硬水、盐、碱和酸性溶液中都很稳定。在贮存时可能变浑浊，但加热至40°C即能澄清。能与水混溶，溶液呈中性，溶于极性有机溶剂。有刺激性。是一种非离子型表面活性剂。清洁剂。润化剂。乳化剂。

湿润剂P40生物学应用：

NP40是一种非离子型表面活性剂，是动物细胞常用的裂解液。在免疫沉淀中所用的抗体是识别构像的表位时使用NP40裂解液。如果抗体是识别线性抗原表位（如合成肽）则可使用强变性裂解液（如RIPA裂解液）。

贮存条件：密封阴凉干燥保存；

细胞培养级二甲基亚砜DMSO的那些用途及配制方法

 二甲基亚砜简称DMSO。是一种含硫的有机物，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等有机物。常温下为无色无臭的透明液体。细胞培养试验中，DMSO一般用作药物溶剂，要求染毒时其浓度不超过0.1%。也配制成高浓度的母液，稀释时取少量到培养基中，而细胞冻存时DMSO的浓度一般为10%。另外DMASO也是一种一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

二甲基亚砜DMSO的用途

1、DMSO广泛应用在人、动物细胞株及细菌噬菌体λ的低温防护中。

2、DMSO作为缓冲液的成分，用于以下的实验：Poly（A+）RNA的纯化， E. coli感受态细胞转化、PCR反应、cDNA文库的扩增、DNA测序、DEAE-葡聚糖介导的细胞转染、聚凝胺介导的DNA转染。

3、DMSO回收膜过滤后的DNA，用于接下来的PCR扩增反应。

4、用于DNA测序的毛细管电泳技术将5% DMSO (v/w)混入2 M尿素中，如果需要可以调整DMSO浓度到100%。

5、不同浓度的DMSO与寡核苷酸的熔点温度关系。

6、低温冷冻前用含有DMSO的培养基高温培养杂交瘤细胞。

7、利用DMSO修饰蛋白中的磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸残基用作磷酸化状态的质谱分析（MS）。

用于细胞冻存DMSO溶液的配制方法

1、配制冷冻培养基：含有细胞培养用培养基、10-20% 血清和5-10% DMSO。

2、用胰酶或其他合适的方法消化贴壁细胞；（细胞最好处于对数增长期）。

3、低速离心（4 °C，250 × g, 10min）收集细胞，吸去培养基。

4、用冷冻培养基悬浮细胞，使细胞密度为106 -107 cells/ml。

5、平均分配细胞，装入冻存管内。

6、依照标准冻存程序冷冻细胞，冻存在-70 °C 或更低的温度内。

DMSO在细胞冻存中的应用

二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。二甲基亚砜（DMSO）是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。

DMSO的储存及稳定性

DMSO容易过冷并且室温下缓慢融化，收到的产品应为固体并非液体状态。固化的DMSO放在室温下可以再次液化，对其本身无损害。属于热稳定化合物，在高达100 °C的酸、碱及中性溶液中保持稳定。温度接近其沸点（189°C），在碱性和中性溶液中仍保持稳定。150°C加热24h，其纯度损失小于0.1%。要制备滤膜除菌的DMSO溶液，推荐使用teflon或nylon膜，尽量不用醋酸纤维素膜。

二甲基亚砜DMSO（细胞培养级）是北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司的常备货产品，货号为D8371。DMSO常用于溶解试剂，也常用于细胞的冷冻保存。过滤除菌时不能使用醋酸纤维素膜，而应该使用尼龙膜。DMSO不能使用PS、PVC、PC材料的容器，而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司是专业生化试剂供应商，生产销售生化试剂、细胞培养基、实验耗材等产品，价格优惠，欢迎咨询订购。

蛋白质含量测定法

蛋白质含量测定法
蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
    folin—酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰lowry反应,而且对后者的影响还要大得多。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用. 上海金畔生物科技有限公司公司提供的Bradford 蛋白浓度测定试剂盒可以用于蛋白质含量测定，简单快速。

Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 
货号：PC0010 
规格：2500T 
保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。 
产品内容： 
    组成  包装（2500微孔)  保存   
    5×G250 染色液  100ml  2-8℃   
    PBS稀释液  30ml  2-8℃   
    蛋白标准(5mg/ml BSA)  1ml  -20℃ 
产品简介： 
  考马斯亮兰G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由 465nm变为 595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保 SDS 的浓度低于 0.1%，Triton X-100 低于 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用上海金畔生物科技有限公司生产的 BCA蛋白浓度测定试剂盒。 
操作说明：操作说明： 
  一．微孔酶标仪法 
 1.  完全溶解蛋白标准品，取 10ul，稀释至 250ul ，使终浓度为 0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl或 PBS 稀释标准品。 
 2. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 1ml 5×G250 染色液，加入 4ml 双蒸水，混匀成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。 
 3.  将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。 
 4.  将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到96 孔板的样品孔
中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2 后。  
 5.  各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250染色液，室温放置 3-5 分钟。 
 6.  用酶标仪测定 A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 
 7.  根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 
 二．分光光度计法 
  如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。 
步骤如下： 
   1.  取八支（或者更多）干净的 10ml 离心管，标记上号。 
   2.  取 100ulBSA加入 PBS 2.4ml 稀释至终浓度为 0.2mg/ml。 
  3.  5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。 
4.  按下表加入试剂(以每孔 5ml 计，多余的用来清洗比色皿) 
离心管号  1  2  3  4  5  6  7（样品管 1） 8（样品管 2）   9（样品管 3）
标准蛋白 BSA  0ul  100ul  200ul  300ul 400ul 500ul 500ul 适当稀
释的样品 1 
500ul 适当稀
释的样品 2 
…… 
PBS  500ul  400ul  300ul  200ul 100ul 0ul  0ul  0ul   0ul 
1XG250 染色液  5ml  5ml  5ml  5ml  5ml  5ml  5ml  5ml  5ml 
5.  反应 3 分钟后测 OD 值。为了实验的准确性，可每间隔 2 分钟加一管染色液，每间隔 2 分钟测一管 OD
值。如下表： 
离心管号  1  2  3  4  5  6  7  8  …… 
加染色液（分钟）  0  2  4  6  8  10  12  14  …… 
测 OD值  3  5  7  9  11  13  15  17  …… 
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。

MRS培养基都有哪些成分

MRS培养基成分

蛋白陈                      10.0g

牛肉粉                      5.0g

酵母粉                      4.0g

葡萄糖                      20.0g

吐温80                      1.0mL

磷酸氢二钾                 2.0g

乙酸钠                       5.0g

柠檬酸三铵                 2.0g

硫酸镁                       0.2g

硫酸锰                       0.05g

琼脂粉                       15.0g

蒸馏水                       1000mL

改良MRS培养基成分：

胰蛋白胨                    10g

磷酸氢二钾                 2g

葡萄糖                       20g

无水醋酸钠                 3g

牛肉浸膏                    10g

柠檬酸三铵                 2g

酵母浸膏                    5g

七水硫酸镁                 0.2g

X-Gal                         0.06mg

吐温-80                     1ml

L-半胱氨酸                 0.5g

水或MJH水提液           1000ml

备注：培养基消后用5N Na0H调至pH6.8；

MRS培养基配制方法

将上述成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH?6.2，分装后121℃高压灭菌15min—20min。

MRS培养基为食品中乳酸菌的选择性增菌培养，用于食品中乳酸菌总数测定。

孟加拉红培养基配方、成分及作用

 蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氢钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;琼脂是培养基的凝固剂;氯霉素可抑制细菌的生长;孟加拉红培养基作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。

制法：上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。

用途：分离霉菌及酵母。

成分：

　　蛋白胨　　　　　　　　　　　　5g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　10g

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　　　1g

　　硫酸镁(MgSO4·7H2O)　　　　　 0.5g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　20g

　　1/3000孟加拉红溶液　　　　　　100mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　1000mL

　　氯霉素　　　　　　　　　　　　0.1g