细胞培养级二甲基亚砜DMSO的那些用途及配制方法

 二甲基亚砜简称DMSO。是一种含硫的有机物，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等有机物。常温下为无色无臭的透明液体。细胞培养试验中，DMSO一般用作药物溶剂，要求染毒时其浓度不超过0.1%。也配制成高浓度的母液，稀释时取少量到培养基中，而细胞冻存时DMSO的浓度一般为10%。另外DMASO也是一种一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

二甲基亚砜DMSO的用途

1、DMSO广泛应用在人、动物细胞株及细菌噬菌体λ的低温防护中。

2、DMSO作为缓冲液的成分，用于以下的实验：Poly（A+）RNA的纯化， E. coli感受态细胞转化、PCR反应、cDNA文库的扩增、DNA测序、DEAE-葡聚糖介导的细胞转染、聚凝胺介导的DNA转染。

3、DMSO回收膜过滤后的DNA，用于接下来的PCR扩增反应。

4、用于DNA测序的毛细管电泳技术将5% DMSO (v/w)混入2 M尿素中，如果需要可以调整DMSO浓度到100%。

5、不同浓度的DMSO与寡核苷酸的熔点温度关系。

6、低温冷冻前用含有DMSO的培养基高温培养杂交瘤细胞。

7、利用DMSO修饰蛋白中的磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸残基用作磷酸化状态的质谱分析（MS）。

用于细胞冻存DMSO溶液的配制方法

1、配制冷冻培养基：含有细胞培养用培养基、10-20% 血清和5-10% DMSO。

2、用胰酶或其他合适的方法消化贴壁细胞；（细胞最好处于对数增长期）。

3、低速离心（4 °C，250 × g, 10min）收集细胞，吸去培养基。

4、用冷冻培养基悬浮细胞，使细胞密度为106 -107 cells/ml。

5、平均分配细胞，装入冻存管内。

6、依照标准冻存程序冷冻细胞，冻存在-70 °C 或更低的温度内。

DMSO在细胞冻存中的应用

二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。二甲基亚砜（DMSO）是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。

DMSO的储存及稳定性

DMSO容易过冷并且室温下缓慢融化，收到的产品应为固体并非液体状态。固化的DMSO放在室温下可以再次液化，对其本身无损害。属于热稳定化合物，在高达100 °C的酸、碱及中性溶液中保持稳定。温度接近其沸点（189°C），在碱性和中性溶液中仍保持稳定。150°C加热24h，其纯度损失小于0.1%。要制备滤膜除菌的DMSO溶液，推荐使用teflon或nylon膜，尽量不用醋酸纤维素膜。

二甲基亚砜DMSO（细胞培养级）是北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司的常备货产品，货号为D8371。DMSO常用于溶解试剂，也常用于细胞的冷冻保存。过滤除菌时不能使用醋酸纤维素膜，而应该使用尼龙膜。DMSO不能使用PS、PVC、PC材料的容器，而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。

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