蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法-技术文章

蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

使用浓度:IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。

预制板:倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。

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New England Biolabs(NEB)品牌代理商

New England Biolabs(NEB)品牌代理商–上海金畔

1. New England Biolabs(NEB)品牌介绍
NEB公司——三十多年的卓越品质
NEB公司成立于二十世纪七十年代中期,拥有众多经验丰富的科学家,是生产生命科学试剂的领导者。目前,NEB为基因组研究提供最齐全的重组酶和天然酶,并且公司业务范围已延伸至蛋白质组学和药品开发领域。
回顾三十余年来的历程,NEB公司作为先驱公司之一,为促进生物科技工业的发展做出了巨大的贡献。NEB美国总部乔迁新址后拥有最尖端的设备,有一座现代化的发酵中心及设备齐全的实验室,这些实验室主要用于产品生产、质量监控、产品开发和基础科研之用。作为首批以商业规模生产限制性内切酶的公司之一,NEB一直专注于内切酶的研究,并保持业内领先水平。NEB公司一贯坚持以科学为本的原则,公司生产的试剂因其高质量、高性价比享誉世界。
重组酶
NEB公司对酶的生产与其基础科研不能分开,通过对限制/修饰系统的克隆和过量表达方面的研究,使我们能够大大降低成本,改善产品质量。NEB已经成功克隆了180多种内切酶,其中大多是完全克隆,少数是部分克隆。目前,NEB可供应240多种内切酶,其中180多种可以重组酶形式提供,同时还有大量的应用途广泛的重组聚合酶和重组修饰酶。
质量与客户服务
NEB公司凭借着严格的质检程序、深入的基础科研以及不断开发的研发项目,承诺为全球科技人员提供高纯度的科研产品。直接与NEB总部联系或与NEB的国际网点联系,即可体验到NEB的个性化客户服务。公司内负责生产以及负责进行质量监控的科学家(产品负责人)也就是技术支持人员。他们为客户解答有关限制核酸内切酶、甲基化酶、以及其他DNA修饰酶、蛋白质修饰酶方面的问题。同时,公司的有机合成部门可提供linkers、引物、adaptors、探针以及寡核苷酸合成等方面的信息。研究人员也可为客户提供技术支持服务,这些研究人员在DNA测序、甲基化、克隆、过量表达、发酵、蛋白质纯化以及蛋白质分析方面都有很深造诣。
基础科研
NEB在分子生物学和寄生虫学方面的基础研究由公司内部的资深科学家负责。这些科学家在他们各自的领域都卓有成绩,经常在业内著名杂志上发表文献,指导博士后工作、为大学生提供暑期实习机会,而且经常受邀去当地学校进行演讲。NEB鼓励公司与外界合作,每周学术探讨会为其他科学家们提供了交流和展示的平台。
环保政策
NEB公司在资助科研项目时最基本原则之一就是:一切工作都应符合保护生态环境。公司产品生产、分析以及运输过程既要满足产品的稳定性,也要符合我们的环保政策。20年来,NEB公司最引人注目的一项环保政策是:回收运输泡沫盒,虽然这项工作首创于美国,但是,目前加拿大、德国以及英国的分公司也同样实施了。公司还在内部开展多方位的回收工作,经常用再生纸张印刷市场宣传资料。这些小细节不会影响产品质量,但是对环境的保护却是显而易见。
公司职责
除环保政策外,通过基金会,NEB还竭力为改善当地社区及全人类尽微薄之力。NEB基金会创立于1982年,属私人性质,其宗旨是支持发展中国家的环保、教育、健康及艺术事业。此外,NEB捐款委员会也经常向当地社区进行捐款活动。

NEB公司的国际网络
NEB的国际销售网络是通过其代理商、附属机构和子公司来实现的。所有销售网点都承诺提供高质量、高性价比以及高水准的服务。国际销售网点覆盖的国家有:阿根廷、澳大利亚、奥地利、比利时、巴西、加拿大、中国、丹麦、德国、芬兰、法国、希腊、香港、冰岛、印度、爱尔兰共和国、以色列、意大利、日本、韩国、卢森堡、马来西亚、墨西哥、荷兰、新西兰、挪威、葡萄牙、新加坡、西班牙、瑞典、瑞士、台湾、泰国、英国。没有列出国家的客户可与位于美国的NEB总部取得联系,以便获得更多信息。

2. New England Biolabs(NEB)重点产品
生产和分销研究型抗体
3. New England Biolabs(NEB)官网
http://www.neb.com
4. 金畔生物代理New England Biolabs(NEB)品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编: 201208
qq:  2743691513
固话总机:021-50837765
订货热线:15221999938
网 址: www.jinpanbio.com
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goldview核酸染料原理是什么-技术文章

goldview核酸染料原理是什么

GoldView核酸染料原理

GoldView是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA,也可用于染RNA。

通过Ames实验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。

GoldView核酸染料使用方法

1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。

2. 加入5μl GoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。

3. 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。

GoldView核酸染料注意事项

1. 胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。

2. 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。

3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。

4. 虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。

电泳结果显示GV灵敏度与EB相当

上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。核酸染料为上海金畔生物科技有限公司自产产品,规格各异,价格优惠,咨询订购可致电:400-968-6088。

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重蒸酚的性质 -技术文章

重蒸酚的性质

                                                                                                              重蒸酚的性质      

        重蒸酚(Phenol,C6H5OH)又名石炭酸,酚; 苯酚; 石炭酸; 羟基苯。是一种具有特殊气味的无色针状晶体,有毒,是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物(如阿司匹林)的重要原料。也可用于消毒外科器械和排泄物的处理,皮肤杀菌、止痒及中耳炎。熔点43℃,常温下微溶于水,易溶于有机溶剂;当温度高于65℃时,能跟水以任意比例互溶。苯酚有腐蚀性,接触后会使局部蛋白质变性,其溶液沾到皮肤上可用酒精洗涤。遇空气和光变红,遇碱变色更快。
         纯净的苯酚使用时不需要重蒸。市售的酚一般为红色或黄色结晶体,使用之前必须重蒸, 除去能引起DNA和RNA断裂和聚合的杂质。将苯酚置于65℃水浴中溶解,重新进行蒸馏,当温度升至183℃时,开始收集在若干个棕色瓶中,纯酚和重蒸酚都应贮存在-20℃。使用前取一瓶重蒸酚于分液漏斗中,加入等体积的lmol/LTris–HCl(pH8.0)缓冲液,立即加盖,激烈振荡,并加入固体Tris摇匀调pH(一般looml苯酚约加l克固体Tris)分层后测上层水相pH至7.6-8.0。从分液漏斗中放出下层酚相于棕色瓶中,并加一定体积0.lmol/LTris-HCl pH8.0)覆盖在酚相上,置4°C冰箱贮存备用。
注意事项;
1、酚是一种强腐蚀剂,能引起腐蚀性损伤,操作时应戴上眼镜和手套。如果皮肤上溅上了酚,应用大量水冲洗或用肥皂水冲洗。
2、酚在空气极易氧化变红,要随时加盖,也可加入抗氧化剂0.1% 8一羟基喹啉及0.2%β-巯基乙醇。
     北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司自产产品重蒸酚,货号为P8440,常卖规格为250ml,科研实验用试剂。可用于DNA和RNA的提取实验。
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果胶酶的作用-技术文章

果胶酶的作用

 果胶酶是从根霉中提取的,可以降解细胞间的果胶质,使细胞从组织内分离出来的酶类物质。果胶酶广泛分布于高等植物和微生物中,根据其作用底物的不同。又可分为三类。其中两类(果胶酯酶和聚半乳糖醛酸酶)存在于高等植物和微生物中,还有一类(果胶裂解酶)存在于微生物,特别是某些感染植物的致病微生物中。

    果胶酶是水果加工中最重要的酶,应用果胶酶处理破碎果实,可加速果汁过滤,促进澄清等。采用果胶酶和纤维素酶的复合酶系制取南瓜汁,大大提高了南瓜的出汁率和南瓜汁的稳定性。并通过扫描电子显微镜观察南瓜果肉细胞的超微结构,显示出单一果胶酶制剂或纤维素酶制剂对南瓜果肉细胞壁的破坏作用远不如复合酶系。又如一种新型果蔬加工酶—粥化酶(含有果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶及蛋白酶等),可提高果蔬果汁的出汁率,增加澄清度,在果蔬加工中有广阔的应用前景。

    果胶酶还可以用作消炎酶制剂。局部外用于烧伤,尤其是脱痂和减少疤痕增生、慢性溃疡、褥疮等。

    北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司是专业从事生化试剂耗材生产与销售的厂家,备有大量现货产品果胶酶,货号为P8181,常卖规格为1g。作为科研实验用试剂类产品,果胶酶具有破坏细胞间的果胶质的功能,促进细胞从组织内分离出来,广泛应用于各实验领域。

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