蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

细菌蓝白斑筛选原理：IPTG为安慰型诱导物，可诱导β-半乳糖苷酶的产生，X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物，在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质：5-溴-4-靛蓝，有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因，则不能产生β-半乳糖苷酶，因此不能分解X-gal产生蓝色底物，所在的菌落呈现白色（相对蓝色），这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

使用浓度：IPTG浓度：50mg/ml；X-gal浓度：20mg/ml

直接涂板法：取IPTG溶液10l，X-gal溶液20l滴在培养基上，同时滴加50～100l无菌水或无菌LB，用涂布棒涂抹均匀，放至表面无水后即可使用。

预制板：倒板时，在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液，混匀后制板即可。

注意：

1、X-gal不溶于水，用二甲基甲酰胺(DMF)溶解；

2、X-gal对光敏感，含有X-gal的平板应该避光保存，在1～2周内使用；

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中，一段时间后蓝白斑显示会比较明显，便于挑选。