上海金畔生物科技有限公司提供叶绿素类产品以及标准品

问：叶绿素A对人体有害吗？主要作用是什么？

答：叶绿素a的分子结构由4个吡咯环通过4个甲烯基（=CH—）连接形成环状结构，称为卟啉（环上有侧链）。卟啉环中央结合着1个镁原子，并有一环戊酮（Ⅴ），在环Ⅳ上的丙酸被叶绿醇（

C20H39OH，分子量893）酯化、皂化后形成钾盐具水溶性。在酸性环境中，卟啉环中的镁可被H取代，称为去镁叶绿素，呈褐色，当用铜或锌取代H，其颜色又变为绿色，此种色素稳定，在光下

不退色，也不为酸所破坏，浸制植物标本的保存，就是利用此特性。在光合作用中，绝大部分叶绿素的作用是吸收及传递光能，仅极少数叶绿素a分子起转换光能的作用。它们在活体中大概都

是与蛋白质结合在一起，存在于类囊体膜上。

世界含叶绿素A最多的植物非螺旋藻莫属，它之中的叶绿素主要是叶绿素A，是其它植物叶绿素的2-3倍。另外螺旋藻叶绿素分子中含有卟啉，其结构与人体动物的血红素十分相似，是人类和动

物血红素的直接原料，所以叶绿素A堪称是“绿色的血液”。又因螺旋藻含有丰富的铁元素，所以螺旋藻中的叶绿A和铁元素的完美组合是治疗缺铁性贫血的最佳搭档。

同时还是水质监测的一项重要参考指标

叶绿素类产品以及标准品

13111032 叶绿素a，来源绿藻Chlorophyll a, from Chlorella 10mg

13123035 叶绿素b Chlorophyll b 5mg

13121039 叶绿素b Chlorophyll b 10mg

13771167 脱镁叶绿素A，Pheophytin a 10mg

13781164 脱镁叶绿素B，Pheophytin b 10mg

100003460 叶绿酸CHLOROPHYLLIN 1g

500003460 叶绿酸CHLOROPHYLLIN 5g

01832198 叶绿素铜钠Sodium Copper-chlorophyllin, Powder 25g

01421303 脱镁叶绿酸a甲酯Pheophorbide a Methyl Ester 100mg

01461301 Pyropheophorbide a  焦脱镁叶绿酸a      50mg

01431300 Pyropheophorbide a Methyl Ester焦脱镁叶绿酸a 甲酯 100mg

02862030 Chlorophyll Oil    叶绿素油 25g

叶绿素A，来源绿藻 Chlorophyll a, from Chlorella      10mg

外观：绿色或墨绿色晶体或粉末

纯度：98.0% (HPLC)

熔点： 117 – 120 degrees C

比旋光度：-262 (D/20degrees C) (Me2CO)

叶绿素BChlorophyll b      5mg或10mg

外观：深绿色或墨绿色粉末

纯度：98.5% (HPLC)

熔点  183 – 185 degrees C

脱镁叶绿素 A Pheophytin a 10mg

外观：墨绿或黑色的结晶粉末或块状

纯度：97.0+% (HPLC)

比旋光度： -126 (D/20degrees C)

脱镁叶绿素B Pheophytin b 10mg

外观：暗绿色或棕黑色晶体粉末

纯度： 99.0+% (HPLC)

脱镁叶绿酸a甲酯Pheophorbide a Methyl Ester 100mg

CAS NO. 5594-30-9

分子式：C36H38N4O5

分子量：606.72

纯度：大于95 %

焦脱镁叶绿酸a Pyropheophorbide a 50mg

CAS NO. 24533-72-0

分子式：C33H34N4O3

分子量：534.66

焦脱镁叶绿酸a 甲酯Pyropheophorbide a Methyl Ester 100mg

CAS NO. 6453-67-4

分子式： C34H36N4O3

分子量：548.69

纯度：大于95 %

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上海金金畔生物科技有限公司提供D5-氨基甲酸乙酯 标准品 2015年国标法

【事件背景】氨基甲酸乙酯是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。氨基甲酸乙酯过去曾用于人类医药用途，但因为含有毒性且疗效欠佳，现已禁用。不同的酒精饮品检出的氨基甲酸乙酯含量不一。 例如烈酒（特别是由樱桃、杏和梅等核果制造的烈酒）的含量一般较高，而啤酒的含量则偏低。不同种类的酒精饮品的氨基甲酸乙酯含量差异很大。由于氨基甲酸乙酯含基因毒性，小鼠长期口服此类物质会产生各种癌瘤。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。 2009年开始，已经有题为《固相萃取一气相色谱法测定葡萄酒中的氨基甲酸乙酯》的论文出版公示，自此酒精饮品中氨基甲酸乙酯的测定为民众关注。2012年，随着白酒中塑化剂事件愈演愈烈，酒精饮品和发酵物品中氨基甲酸乙酯检测问题再一次被提上日程。

【国标出台】 2015年初，《食品安全国家标准 食品中氨基甲酸乙酯的测定》（GB 5009.223-2014）公布，其规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的气相色谱-质谱法测定。标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的测定。此标准为强制标准，即具有法律属性，在一定范围内通过法律、行政法规等手段强制执行的标准。

自此，致癌物-氨基甲酸乙酯的含量和检测，成为酒精饮品和发酵食品相关企业、机构、检验检测机构不得不说的“秘密”！在国家强制标准验证阶段，我们已经开发并优化了符合国家标准方法的碱性硅藻土柱，推出成熟的商品化产品Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土），适逢2015年新版国标出台，此产品完美贴合此项标准！

GB 5009.223-2014标准中提到的“碱性硅藻土固相萃取柱” 并未提到填料处理方法，客户盲目寻找柱子，未必符合国家标准！博纳艾杰尔经过大量标准验证，确保Cleanert EC柱（订货号：EC200012）结合国标产品进行白酒中氨基甲酸乙酯测定，检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。（具体检测方法见下文） ！

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酒中氨基甲酸乙酯的测定

MF00013

方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014

摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，完全满足分析检测的要求。

氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。

一、试剂和材料

标准溶液配制

1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。

2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。

1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。

分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）

气相色谱柱：DA-INNOWAX柱

二、实验方法

样品前处理

准确量取 2.00 ml 酒样（注：啤酒样品EC含量较低，取4 mL样品上样），加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯上，抽真空，让试样慢慢渗入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中，静置约 10 min，先用 10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。

GC-MS条件

色谱柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；

载气：氦气，纯度≥99.999％

流速：1 mL/min；

电离方式：EI源。

离子源温度：230℃；

进样方式：不分流进样；

样量：1-2μL；

氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；

D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64

三、实验结果

色谱图

图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图

图2 氨基甲酸乙酯质谱图

3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图

标准曲线

酒样加标的回收率及精密度

方法检出限

当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。

四、结论

本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相柱（碱性硅藻土）前处理结合DA-INNOWAX柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。

五、订货信息

方法二、液相方法-荧光检测法

一、原理

在盐酸中，氨基甲酸乙酯与9-羟基吨反应，生成具有荧光特性的衍生物，经色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量

二、衍生方法

量取0.02mol/L的9-羟基吨500μL添加到1ml酒精度调整至40%的样品或标样中，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混匀使反应完全，放暗处衍生至少60min，过0.45μm滤膜，待测。

三、样品前处理方法：同上

四、色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18，4.6 mm*250 mm，5 μm（P/N：VA952505-0）

流速：0.8 mL/min

柱温：30℃

激发波长：233 nm

发射波长：600 nm

流动相：A：0.02M乙酸钠（pH=7.2），B：乙腈，梯度程序如下

注意事项：

衍生试剂配置完成后，应4℃避光保存（有效期1个月）

在加样时，尽量缩短操作时间，避免衍生试剂见光时间过长分解

该衍生反应需要在暗处进行

衍生时间不得少于30min

流动相pH值要调整准确

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