麦芽汁琼脂培养基配方

 麦芽汁琼脂培养基英文名称为Malt Extract Agar，此培养基的主要用于酵母菌的培养、鉴定及保存菌种。  

麦芽汁琼脂培养基配方成分(g/L)

麦芽浸粉                  130.0

氯霉素                      0.1

琼脂                       15.0

pH值6.0 ± 0.2            25℃

上海金畔生物科技有限公司备有现货产品麦芽汁琼脂培养基，货号为M8570，常买规格为250g，主要用于用于霉菌和酵母菌计数。

关于上海金畔生物科技有限公司中性树胶的作用和使用

中性树胶是将载玻片和盖玻片粘合在一起的一种粘合剂，用于长久保留生物组织切片封存。中性树胶透明度高，几乎和光学玻璃一样清晰。该货品属中性，不会腐蚀玻璃。如果不放心可以在粘合以前用盐酸酒精泡一泡，晒干再粘合会更好。

中性树胶是显微技术上使用的优良封藏剂，与加拿大树胶性质相似，用途相同。中性树胶是一种天然树胶，经提炼与中和后溶解在二甲苯中成60%溶液，折光率与玻璃近似，干燥后凝结成透明无色的固体，没有收缩变黄、纹裂的弊病，没有像加拿大树胶有年久变黄切片氧化退色等缺点。切片标本有苏木精、曙红、番红、固绿、洋红染色的，保藏数年颜色无变化。许多整装标本如吸血虫、涤虫等寄生虫，用中性树胶封固，均能取得优良效果。

中性树胶的使用方法

封片方法很简单，在载玻片中央滴2-3滴树胶液，然后把盖玻片慢慢放上去，轻轻挤压，树胶液会向外侧扩散至整个镜片，通风晾几个小时后用棉球粘上二甲苯或者松节油把镜片边缘多余的树胶擦洗干净。然后再放在通风处晾干，然后再放在通风处晾2个月。不过可能在烈日下暴晒会快点。封片可常温保存。

中性树胶的注意事项

1、二甲苯有毒，避免与皮肤或眼睛接触。

2、载玻片中央滴树胶液要滴在一起，否则容易起气泡

3、中性树胶是以二甲苯为溶剂的，封合后挥发很慢，制作的玻片起码在通风处晾一两个月才没有二甲苯的味道。

关于中性树胶的问与答

问：用中性树胶封片，时间长了会不会变黄或发霉？

答：不中性树胶封片不容易长霉，可能是因为中性树胶的溶剂二甲苯有杀霉菌作用。

问：中性树胶怎么稀释？用什么稀释最好？

答：稀释中性树胶要加稀释液，使用二甲苯最好，但是二甲苯有毒，使用时要注意不要与皮肤或眼睛接触。

问：石蜡切片封片用的树胶很久不用，凝固了，应该怎样才能再成液态？

答：可用二甲苯溶解。

问：中性树胶封片不好，有气泡，还弄到了玻片背面。请问，能洗掉重新封吗？

答：可以的，放到二甲苯里泡，不过要小心点操作，让盖玻片滑下来，不要硬掀起来，以防把组织也一块掀下来。也可以等泡好了,就轻轻的在二甲苯中抖动,让盖玻片自然掉下。当你把盖玻片泡下来了后,不要马上又封片,因为切片上还有一些中性树脂,会影响以后镜下观看。盖玻片掉了后，拿起切片在里面搅，尽量把树脂洗掉。

问：切片染色后用中性树胶封片的原因是树胶与玻璃的折射率几乎相等还是树胶的折射率比玻璃大？

答：中性树胶与玻璃的折射率几乎相等的。

问：在用中性树胶封片时不小心弄到的手上，怎么洗掉？

答：中性树胶一般用强化学试剂去除，但这些试剂均有毒。你是粘在手上，那没办法，只有用刀一点点小心刮去。不过树胶过不了多久自己会掉的，一天过去就没什么了。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司长期备货中性树胶，货号为G8590，常卖规格为100ml。其透明度和光学玻璃一样清晰，不会影响切片标本的观察。目前中性树胶广泛使用在生物学，医学作为生物切片封藏剂，以及光学琉璃仪器的粘固剂。

嘌呤霉素的作用有哪些

嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种抗生素，广泛用作蛋白质合成的抑制剂。其结构与氨酰tRNA 3′端上的AMP结构相似，肽酰转移酶能促使氨基酸与嘌呤霉素结合形成肽酰嘌呤霉素，从核糖体上脱落，从而使蛋白质合成反应中断。嘌呤霉素的作用如下：

嘌呤霉素的作用：

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素Puromycin抗性基因：

对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的?Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomycesalboniger。

嘌呤霉素Puromycin最普遍应用：

1）嘌呤霉素作用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。

2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

化学特性：化学名称：<b

</b

3(a-Amino-p-methoxyhydro?cinnamamido)-3–deoxy-N,N–dimethyladenosine·2HClCAS

No.：58-58.2，

分子式：C22H29N7O5.2HCl，

分子量：544.43g/mo

纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。

嘌呤霉素Puromycin应用浓度：哺乳动物细胞的推荐使用浓度为1-10?μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

嘌呤霉素可由白色链球菌（Streptomyces.alboniger）发酵制得的抗生素。熔点175.5～177.0℃。旋光度-11 （乙醇）。在酸性溶液中分解成为6-二甲胺嘌呤，O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。结构与氨基酰tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端基因相似，因而它可作氨基酰tRNA的类似物，从而取代一些氨基酰tRNA进入核糖体的A位与正在延伸的多肽链结合，当延长中的肽转入此异常A位时，容易脱落，以肽基嘌呤霉素的形式从核糖核蛋白体上早期解离,终止肽链合成,从而抑制了蛋白质的合成。由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用，故难于用做抗菌药物，嘌呤霉素作用于研究蛋白质合成的生物化学工具。有人试用于肿瘤治疗。

上海金畔生物科技有限公司细胞凋亡检测试剂盒的原理及使用说明

细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡是为维持环境稳定，为更好的适应胜春环境而主动争取的一种死亡过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用，是一种字体损伤的现象。

细胞凋亡检测试剂盒原理

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35.8 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将FITC-Annexin V与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

细胞凋亡检测试剂盒使用步骤

1. 调整待测细胞的浓度为5×105-1×106个/ml。

2. 取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清。

3. 加入1ml预冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤）。

4. 重复步骤3两次。

5. 将细胞重悬于200μl Binding Buffer。

6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30 分钟。

7. 加入300μl Binding Buffer，在1小时内用流式细胞仪检测。

8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

使用细胞凋亡检测试剂盒的注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。

3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。

4.在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留影响实验结果。

5.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。

6.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。

7.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变。

8.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司自产细胞凋亡检测试剂盒货号为CA1020，常卖规格为20T、50T、100T。上海金畔生物科技有限公司公司专业生产销售生化试剂，细胞培养基，实验耗材等产品，专注科学研究。

琼脂糖凝胶与核酸电泳小知识

影响核酸电泳迁移率的几个因素

1、核酸分子大小

在一定浓度的琼脂糖凝胶中，DNA片段迁移距离和其含有的碱基对数量成反比，因此可以通过与标准条带迁移距离进行比较，由此得出目的条带的大小，但这仅对双链线性的DNA比较准确（DNA Marker一般为双链线状DNA），且对大于20kb的DNA不适用（普通琼脂糖凝胶很难将其分开）。

2、核酸分子构象

DNA分子在电场中的迁移速度不仅和分子量有关，还和它本身的构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中的移动速度不一样，移动速度次序为：共价闭环DNA>线性DNA>开环DNA。当琼脂糖浓度太大时，环状的DNA一般不能进入胶内（停留在孔中）。

3、琼脂糖浓度

同样的线状DNA分子在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，DNA电泳迁移率的对数和琼脂糖凝胶浓度呈线性关系，凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。

琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围

凝胶浓度（%）           线性DNA长度（bp）

    0.5                           1000~30000

    0.7                           800~12000

    1.0                           500~10000

    1.2                           400~7000

    1.5                           200~3000

    2.0                           50~2000

4、电源电压

在低电压时，线状DNA片段的迁移速率和所加电压成正比。但电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分离率达到最大，所使用的电压不得超过5V/cm。

5、电泳方式

用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。垂直型电泳，一般用聚丙烯酰胺凝胶做为支撑物。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。

6、嵌入染料的存在

常用的荧光染料EB可以嵌入到堆积的碱基对之间，使其刚性更强，并使其迁移速率有所下降。

7、电泳缓冲液的离子强度

电泳缓冲液的组成和离子强度也能影响DNA的迁移速度。在离子存在很少的情况下（如无用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误用10×电泳缓冲液），则电导率很高并产热明显，严重时能引起凝胶融化或DNA变性。