天冬氨酸的性质及主要用途-技术文章

天冬氨酸的性质及主要用途

天冬氨酸是一种α-氨基酸,又称为天门冬氨酸。天冬氨酸是生物体内赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体。

天冬氨酸的性质:

熔点:>300 °C(lit.)

比旋光度:-25.8 ° (c=5, 5N HCl)

密度:1.66

折射率:-25 ° (C=8, 50% HCl)

储存条件:Store at RT(室温下保存)

水溶解性:SOLUBLE(可溶)

天冬氨酸的用途:

1.在化工方面,可以作为制造合成树脂的原料,亦可以作为化妆品的营养性添加剂等。

2.在食品工业方面,天冬氨酸是一种良好的营养增不剂,添加于各种清凉饮料,也是甜味素(阿斯巴甜)-天冬酰苯丙氨酸甲酯的主要原料。

3.在医药方面,可以用于治疗心脏病,肝脏病,高血压症,具有防止和恢复疲劳的作用,和多种氨基酸一起,制成氨基酸输液,用作氨解毒剂,肝功能促进剂,疲劳恢复剂。

4.天冬氨酸的衍生物N- 甲基-D- 天冬氨酸(NMDA)能明显增强视神经单元放电单元的兴奋作用,可作为哺乳动物中枢神经系统中重要的兴奋神经递质受体之一。

紫杉醇的性质及注意事项-技术文章

紫杉醇的性质及注意事项

紫杉醇提取与红豆杉科植物红豆杉的干燥根,树叶以及树皮,用于含量测定、鉴定、药理实验等。

紫杉醇的性质:

紫杉醇白色结晶体粉末。无臭,无味。难溶于水,易溶于甲醇、乙腈、氯仿、丙酮等有机溶剂。熔点:123~216℃旋光度:-49.0~55.0°(甲醇)

紫杉醇的鉴别:

a.红外吸收:红外光谱图中的主要吸收带与对照品一致。

b.HPLC鉴别:在含量检测中,检测制备的色谱图中主峰的保留时间与标准制备色谱图中主峰的保留时间一致。

纯度:99-100%,以无水无溶剂的干燥品计.

有关物质:相关物质总≤2.0%

有机挥发性杂质:符合美国药典(USP)和中国药典(CP)有机挥发性杂质要求.

比旋度:[α]20 D=-49.0°~55.0°(10mg/mL的甲醇溶液),以无水无溶剂的干燥品计。

水分:≤4.0%

炽灼残渣:≤0.2%。

紫杉醇的注意事项:

1.血液学毒性:为限制剂量提高的主要因素,一般在白细胞低于1500/mm3时应辅助应用G-CSF,血小板低于30,000/mm3时应输成分血。

2.过敏反应:除了预处理外,如只有轻微症状如面潮红、皮肤反应、心率略快、血压稍降可不必停药,可将滴速减慢。但如出现严重反应如血压低、血管神经性水肿、呼吸困难、全身荨麻疹,应停药并给以适当处理。有严重过敏的病人下次不宜再次应用紫杉醇治疗。

3.神经系统:最常见为指趾麻木。有约4%的病人,特别是高剂量时可出现明显的感觉和运动障碍及腱反射减低。曾有个别报告在滴注时发生癫痫大发作。

4.心血管:一过性心动过速和低血压较常见,一般不需处理。但在滴注的第一小时应严密观察,以后除有严重传导阻滞的病人不必每小时观察一次。

5.关节和肌肉:半数左右的病人在用药后2~3天会感到关节和肌肉疼痛,与所用剂量相关。一般在几天内恢复。在给予G-CSF的病人肌肉痛会加重。

6.肝胆系统:由于紫杉醇大部由胆汁中排出,对有肝胆疾病的病人应谨慎观察。在数千例的资料中约8%的病人有胆红素升高,23%的病人碱性磷酸酶升高,18%有谷草转氨酶升高。但当前尚无资料说明紫杉醇对肝功有严重损害。

7.其他:消化道反应虽常见但一般不重,少数可有腹泻和粘膜炎。轻度脱发也较常见。

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果胶酶的化学性质及用途介绍-技术文章

果胶酶的化学性质及用途介绍

果胶酶广泛分布于高等植物和微生物中,本质上是聚半乳糖醛酸水解酶,果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量,从而测定果胶酶活力。

果胶酶的化学性质:

一般为灰白色粉末,或棕黄色液体。商业用果胶酶的有效成分主要有三种酶。一种是果胶甲酯酶(Pectin pectylhydrolase)(EC 3.1.1.11),主要作用为催化甲酯果胶以脱去甲酯基,产生聚半乳糖醛酸苷键和甲醇。另一种是聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase;EC 3.2.1.15)其作用是使果胶中以α-1,4-键结合的半乳糖醛基水解成为还原糖。第三种是果胶裂解酶(Pectin lyase;EC 4.2.2.10),可使果胶断裂而得寡糖。此外,起次要作用的尚有β-葡聚糖酶(β-Glucanase;EC 3.2.1.6)、β-糖苷酶(β-Glucosidase;EC 3.2.1.21)和木聚糖酶(Xylanase;EC 3.2.1.32)。作用温度40~50℃,最适pH值为3.5~4.0。铁、铜、锌离子有明显抑制作用。溶于水。

天然品在高等植物(如柑橘类、苹果、番茄等)和微生物中广泛存在。

果胶酶的用途:

主要用于果汁澄清、提高果汁过滤速度、提高果汁得率、降低果汁粘度、防止果泥和浓缩果汁的凝胶化、加强葡萄汁的颜色以及果蔬下脚料的综合利用等方面。最高参考用量200mg/kg。

如葡萄汁用0.2%果胶酶在40~42℃下静置3h,即可完全澄清。葡萄浆用0.05%果胶酶在30~35℃下处理,可提高得率15%,提高过滤速度l倍。

果胶酶可催化果胶中的甲酯水解,以及将多聚半乳糖醛酸分解成较小分子多聚物。可作为饮料的澄清剂,也用于橘子脱囊衣等。我国规定可用于糖水橘子罐头(去囊衣)、果酒、果汁,按生产需要适量使用。

果胶酶还可用作植物细胞杂交和花药培养;促进果胶水解为蔗糖和半乳糖醛酸。

LB培养基和MS培养基的比较与区别-技术文章

LB培养基和MS培养基的比较与区别

我们都只lb培养基与ms培养基成分和用途都有很大不同。那么他们区别到底在哪呢,下面就给你详细介绍。

一、LB培养基

LB一般被解释为Luria-Bertani培养基,根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语的lysogeny broth,即溶菌肉汤。
1.用途
一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求,可分为液体培养基和固体培养基。
2.LB培养基的配方
胰蛋白胨(Tryptone))10g/L
国产的胰蛋白胨一般是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化而得到,与进口的成分和工艺不同。进口的胰蛋白胨以酪蛋白为基础进行消化,实为胰酪蛋白胨;而国产的是以肉、骨为原料。含有丰富的氮源、氨基酸等,可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定
酵母提取物(YE)5g/L
采用以蛋白质含量丰富的食用酵母为原料,采用自溶、酶解、分离、浓缩等现代生物高新技术,将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解后精制而成的一种棕黄色可溶性膏状或浅黄色粉状纯天然制品。主要成分为多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族维生素及微量元素。
氯化钠(NaCl)10g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4,该pH适合目前使用最广的原核表达菌种大肠杆菌(E.coli)的生长。
二、MS培养基
Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 基于此,这种培养基就用他们的名字来命名了。
1.用途
可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。
2.MS固体培养基的配方(单位:mg/L)

由大量元素、微量元素和有机成分组成,配方如下表。也可将大量元素、微量元素和有机成分分别配成浓度为配方的5-10倍,用时稀释。

LB培养基和MS培养基的比较与区别-技术文章

克拉霉素的用途及作用机制-技术文章

克拉霉素的用途及作用机制

克拉霉素又名加红霉素,是红霉素的衍生物,在生化试剂实验研究中,可用于分子生物学和组织培养。

克拉霉素的用途:

克拉霉素为生化试剂,在组织培养中起到防止微生物污染和抗性筛选的作用。另外再医疗中克拉霉素品属14元环大环内酯类抗生素。抗菌谱与红霉素、罗红霉素等相同,但对革兰阳性菌如链球菌属、肺炎球菌、葡萄球菌的抗菌作用略优,且对诱导产生的红霉素耐药菌株亦具一定抗菌活性。克拉霉素及其在体内的代谢产物对流感杆菌的抗菌作用增强。该品对淋球菌、李斯忒菌、空肠弯曲菌也有一定作用,而对嗜肺军团菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、溶脲脲原体等。

克拉霉素特点为在体外的抗菌活性鱼红霉素相似,单在体内对部分细菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、感嗜血杆菌等的抗菌活性比红霉素强。克拉霉素与红霉素之间有交叉耐药性。

克拉霉素的作用机制是通过阻碍细胞核蛋白50S亚基的联结,抑制蛋白合成而产生抑菌作用。

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氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV-培养基配方-培养基

氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV-培养基配方

氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV是上海金畔生物科技有限公司公司改良的培养基,产品符合中国药典,提供氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV用途,原理,用法,配方,以及质量控制等信息。
原理:胰蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾是缓冲剂;氯化镁增加培养基的渗透压;孔雀绿抑制非沙门氏菌的细菌;较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性。

用途:用于沙门氏菌的选择性增菌培养(GB标准)
用法:称取本品3.0g,加入100ml蒸馏水,121℃高压灭菌15分钟,备用。
质量控制:

在42±1℃培养18-24小时。

质控菌株 菌株编号 生长情况 其它特征
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923  /
大肠埃希氏菌 ATCC 25922 +/-  /
沙门氏菌 ATCC 14028 +++  /

配方:

胰蛋白胨
氯化钠
磷酸二氢钾
氯化镁
孔雀绿
4.5
7.2
1.44
36.0 
0.036

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蛋白浓度测定的方法具体有哪些?-技术文章

蛋白浓度测定的方法具体有哪些?

蛋白质浓度测定是利用化学或物理方法测定蛋白质浓度,一般蛋白浓度测定的方法有很多种,每种方法都有优点和局限性,下面我们就具体看一下蛋白浓度测定的方法都有哪些。

蛋白浓度测定的方法:

1. 紫外分光光度法

紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核酸对测定结果引起极大误差,其最大吸收在260nm。所以同时测定280及260nm两种波长的吸光度,通过计算可得较为正确的蛋白质含量。

2. 双缩脲法

利用半饱和硫酸铵或27.8%硫酸钠——亚硫酸钠可使血清球蛋白沉淀下来,而此时血清白蛋白仍处于溶解状态,因此可把两者分开,这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法称为盐方法。盐析分离蛋白质的方法不仅用于临床医学,而且还广泛地用于生物化学研究工作中,如一些特殊蛋白质—酶、蛋白激素等的分离和纯化。

蛋白质和双缩脲一样,在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物(双缩脲反应),且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比,因此可于蛋白质的定量测定。

但必须注意,此反应并非蛋白质所特有,凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有—CH2—NH2等结构化合物,双缩脲反应也呈阳性。本实验用27.8%硫酸钠—亚硫酸钠溶液稀释血清,取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量,剩余部分则用滤纸过滤,使析出的球蛋白与白蛋白分离,取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白之比即所谓的白/球比值。

3. Folin-酚试剂法

目前实验室较多用Folin-酚法测定蛋白质含量,此法的特点是灵敏度高,较双缩脲高两个数量级,较紫外法略高,操作稍微麻烦,反应约在15分钟有最大显色,并最少可稳定几个小时,其不足之处是干扰因素较多,有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。其原理是蛋白质中含有酚基的酪氨酸,可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物,颜色深浅与蛋白含量成正比。

4. 考马氏亮蓝G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料结合法测定蛋白质的优点是灵敏度较高,可检测到微量蛋白,操作简便、快迅,试剂配制极简单,重复性好,但干扰因素多。考马氏亮蓝G-250具有红色和青色两种色调、在酸性溶液中游离状度下为棕红色,当它通过疏水作用与蛋白质结合后,变成蓝色,最大吸收波长从465nm转移到595nm处,在一定的范围内,蛋白质含量与 595nm的吸光度成正比,测定595nm处光密度值的增加即可进行蛋白质的定量。

以上便是实验室中常见的几种蛋白浓度测定的方法,另外还有凯氏定氮法和BCA法,有凯氏定氮法结果最精确,但操作复杂,BCA法又以其试剂稳定,抗干扰能力较强,结果稳定,灵敏度高而受到欢迎。

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lb培养基是什么培养基-技术文章

lb培养基是什么培养基

培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。那么LB培养基是什么培养基?LB一般被解释为Luria-Bertani,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语lysogeny broth,即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。

LB培养基是一种培养基的名称,是微生物学实验中最常用的培养基,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.可分为液体培养基和固体培养基。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称普通培养基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。

酵母提取物:酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提,再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末,其中氨基酸含量30%以上,总蛋白50%以上,核苷酸10%以上,广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。

胰化蛋白胨:一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的白色粉末,含有丰富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压),其次是提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基用途

用于一般细菌培养,特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理:
蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
LB培养基配制方法

配制每升培养基,应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入:胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。
LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素,并且倒好板。
LB固体培养基倒板
1.配制:100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。
2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。
3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。
4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。 配400ml的话成分按比例减少就行了,pH还是要按规定的。
LB培养基设计不同的离子对大肠杆菌生长状况的影响

以下方法仅供参考:
1.首先养几个平板固体培养基培养的大肠杆菌,保证这些细菌来自于同一个克隆;
2.采用液体培养并用分光光度计测定浊度来评价大肠杆菌生长。
3.盐可选择氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化锌、铵盐、磷酸盐等;
4.浓度差别可做,可不做;
5.因为分光光度计的准确性有一定要求,培养时间就不能太长,最多8小时;
根据这些条件设计实验就容易了。大体上是,先配制好各种液体培养基;然后从1中挑一个菌落放到一个起始的基本LB液体培养基,培养到稍微有点浑时,就可以向各种培养基中加同样体积的细菌;最后就是测定OD值了。记得每个培养基做3个重复管。

亚利桑那菌琼脂(SA)-培养基配方-培养基

亚利桑那菌琼脂(SA)-培养基配方

亚利桑那菌琼脂(SA)是上海金畔生物科技有限公司公司改良的培养基,产品符合中国药典,提供亚利桑那菌琼脂(SA)用途,原理,用法,配方,以及质量控制等信息。
原理:蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;卫矛醇、蔗糖、葡萄糖为可发酵糖类,发酵糖产酸的菌落呈黄色;亚利桑那菌可利用丙二酸盐产碱;牛胆盐抑制革兰氏阳性菌,但不影响沙门氏菌的生长;硫代硫酸钠可以被某些细菌还原成硫化氢,与柠檬酸铁铵生成黑色硫化铁;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂。

用途:用于亚利桑那沙门氏菌的选择性分离(SN标准)
用法:称取本品88.5g,溶解于1000ml蒸馏水中,加热溶解并不停搅拌,冷至50-55℃,倾入无菌平皿。无需高压灭菌。
质量控制:

 在36±1℃培养18-24小时。

菌    名 菌    号 生长状况 培养特征
亚利桑那菌 CMCC(B)47001 良好 菌落黑心,周围培养基红色
鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 良好 菌落黑心,周围培养基黄色
福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 良好  菌落呈无色
大肠埃希氏菌 ATCC25922  良好  菌落黄色,周围培养基黄色
粪链球菌 CMCC32223 被抑制 ――

配方:

蛋白胨
酵母浸粉
葡萄糖
蔗糖
牛胆盐
硫代硫酸钠
丙二酸钠
柠檬酸铁铵
氯化钠
卫矛醇
酚红
琼脂
pH值7.1 ± 0.1
12.0
3.0
1.0 
12.0
9.0
5.0
6.0
1.5
5.0
20.0
0.04
14.0
25℃

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DNAmarker的用途及分类-技术文章

DNAmarker的用途及分类

DNA marker一般指的是分子量标记,在分子生物学试验中指的是电泳中用来代表DNA长度的标记,基因组学上是指个体特异性的遗传标记。那么DNA marker在不同的领域具体有什么用途和意义呢?

DNA marker的用途:

DNA Marker 是分子量不同的DNA片段,主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时,加样用做对比来检测琼脂糖凝胶是否有问题。通过其大小可以粗略估算样品DNA分子量的大小。主要是要获得病毒等大的基因组片段,然后用适当的酶切,切割完全以后,就能得到相应的图谱。

现在常用的DNA MARKER有两种,一种是病毒等DNA经过酶切获得的,分子量大小有零有整,另外一种是固定数值的,比如100bp,200bp等。如果你手头有任何一个载体,而且它的序列完全清楚,那么可以采用PCR的方法获得一系列大小不同的片段,比如上游引物可以使用一个,然后用数数的方法确定下游100bp处的下游引物,扩增出的就是100bp的片段,200bp处的引物就是200bp的片段,依此类推,可以获得一系列不同大小的片段,扩增后,把它们放到一起,就获得了自制的Marker了。

DNA marker的分类或分型:

λ-EcoT14 I digest 

λ-Hind III digest 

φX174-Hae III digest 

φX174-Hinc II digest 

DNA Marker DL2,000 

DNA Marker DL15,000 

Wide Range DNA Marker (100 – 6,000) 

Wide Range DNA Marker (500 – 12,000) 

Wide Range DNA Marker (500 – 15,000) 

20 bp DNA Ladder Marker 

50 bp DNA Ladder Marker 

100 bp DNA Ladder Marker 

150 bp DNA Ladder Marker 

200 bp DNA Ladder Marker 

250 bp DNA Ladder Marker 

500 bp DNA Ladder Marker 

1 kbp DNA Ladder Marker 

Supercoiled DNA Ladder Marker

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