同仁化学Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测 L248 细胞脂质过氧化物检测| 日本DOJINDO

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测 L248 细胞脂质过氧化物检测

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测	L248	细胞脂质过氧化物检测
MitoPeDPP试剂	M466	线粒体内脂质过氧化物检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。

同仁化学Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248| 日本DOJINDO

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

细胞脂质过氧化物检测试剂盒

Liperfluo

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，充氮气

运输条件：室温

分子式：

C51H41N2O8P

分子量：

840.85

特点：

● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化

● 比BODIPY C11更适合于胞内定位

● 铁死亡常见指标之一

下载说明书

产品文献

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50μg*5

铁死亡检测方案

高分文献

荧光/流式检测

LiperFluo高分文献整理（点击查看）

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规格性状

产品概述

研究领域

原理

荧光特性

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测

NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测

规格性状

性状：深红色结晶粉末或固体。

纯度（HPLC）：90.0%以上

核磁共振谱：符合一致性

<使用次数>每50µg可用5-50次

产品概述

Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

特点：

1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3）高度脂质过氧化物特异性

研究领域

在铁死亡研究中：

作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

细胞种类 (铁死亡诱导剂）	论文信息
人支气管上皮细胞（RSL3）	Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
小鼠成纤维细胞(RSL3)	Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis.
HeLa细胞 (添Erastin或Brefeldin A)	Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells.

原理

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

荧光特性

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm

操作步骤

1.在培养皿或孔板中接种细胞。

2.去除上清液，用无血清培养基洗涤细胞1次。

3.加入适量的Liperfluo工作溶液，37℃孵育30 m in。

*根据实验条件等不同因素，Liperfluo的最佳浓度也不同。需要提前摸索条件。

4.去除上清液并用无血清培养基洗涤细胞2次。

5.在荧光显微镜下观察细胞或使用流式细胞仪分析细胞。

实验例

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种H eLa细胞 (3.0×10 4 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基)，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将200 l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo 溶液加入8孔板中，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 l用H BSS稀释的500 m ol/l的 t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用共聚焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用流式细胞仪检测HeLa细胞

1) 将H eLa细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基) 接种至6孔板 (Therm o公司) 中，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将2 m l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5% 的

C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液，用2 m l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 m l用H BSS稀释的500 m ol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的M EM 培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为H BSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清D M EM 培养基)，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，加入200 l用无血清D M EM 培养基稀释的50 m ol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基，用200 l H BSS清洗2次。

4) 去除H BSS，加入200 l用H BSS稀释的5 m ol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中

培养30 m in。

5) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

常见问题Q&A

Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针，哪种方法比较好？

A1: 都可以。

先加Liperfluo再加药

用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

（1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。

（3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

（6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

先加药再加Liperfluo

（1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

（4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？

A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。

其他的改善方法：

(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。

(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。

Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？

A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。

Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？

A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。

(溶解后请务必用铝箔等遮光)。

荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。

因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。

1.增强激发光的强度。

2.延长曝光时间。

Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞

A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。

有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。

参考文献

以下文献根据影响因子由高到低排序：

细胞种类	期刊名	出版年	影响因子	论文题目(含原文链接)
小鼠胚胎成纤维细胞	Nature	2023	69.5	Phase separation of FSP1 promotes ferroptosis
H9C2（大鼠心肌细胞）	Nature	2022	69.504	A non-canonical vitamin K cycle is a potent ferroptosis suppressor
B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞); HT-1080(人纤维肉瘤细胞)	Nature	2019	69.504	CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy
MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)	Nature Chemical Biology	2016	12.587	Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis
RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)	Nature Chemical Biology	2020	12.587	Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death
Brain slices from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片)	Nature Communications	2020	12.121	Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression
HBE(人支气管上皮样细胞)	The Journal of Clinical Investigation	2018	11.864	Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium
HL-60(人骨髓细胞白血病细胞)	Cell Death and Differentiation	2020	10.717	Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2
NCI-ADR/Res (NAR) 人卵巢腺癌细胞	Biomaterials	2019	10.317	Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy
4T1细胞(小鼠乳癌细胞)	ACS Applied Materials & Interfaces	2019	8.758	Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation
BV2 Microglial(小鼠小胶质细胞)	Particle and Fibre Toxicology	2020	7.546	Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia
BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞)	Particle and Fibre Toxicology	2017	7.546	SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses
HT-22（细胞）	Antioxidants	2023	7.0	Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy
3T3-L1 adipocytes(小鼠脂肪细胞)	Cell Death and Disease	2018	6.304	Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300
OEC-M1(人口腔上皮细胞)	Biomaterials Science	2018	6.183	Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells
Hacat(人永生化角质形成细胞)	Free Radical Biology and Medicine	2017	6.17	Blue light-induced oxidative stress in live skin
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	Free Radical Biology and Medicine	2015	6.17	New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death
HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞	Oxidative Medicine and Cellular Longevity	2020	5.076	Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity
Murine T cells(鼠T细胞)	The Journal of Immunology	2019	4.886	Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	Molecular Neurobiology	2020	4.5	Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells
HEI-OC1(耳蜗毛细胞)	Journal of Cellular and Molecular Medicine	2020	4.486	Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity
PMVECs(肺微血管内皮细胞)	Lung Cellular and Molecular Physiology	2019	4.406	Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury
HepG2(人肝癌细胞)	Journal of Agricultural and Food Chemistry	2019	4.192	Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes
HeLa(人宫颈癌细胞)	Communications Biology	2018	4.165	Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells
THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL)	Scientific Reports	2016	3.998	Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators
4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞)	Nanotechnology	2016	3.551	WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	RSC Advances	2012	3.119	A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells
Burkitt’s Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞)	Biochemical and Biophysical Research Communications	2019	2.985	Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma
THP-1(人髓系白血病单核细胞)	Canadian Journal of Physiology and Pharmacology	2019	1.946	Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction
Horse breed stallions(种马精子)	Animal Reproduction Science	2019	1.66	Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm
Human hair(人头发)	Cosmetics	2018	0.732	Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure

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● 比BODIPY C11更适合于胞内定位

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特点：

1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3）高度脂质过氧化物特异性

研究领域

在铁死亡研究中：

作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo

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人支气管上皮细胞（RSL3）	Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
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原理

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荧光特性

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激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm

操作步骤

1.在dish等容器中接种细胞并培养。

2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。

3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。

※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。

4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。

5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。

实验例

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×10⁴个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO₂培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养60 min。

6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用流式细胞仪检测HeLa细胞

1) 将HeLa细胞 (1.0×10⁵个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO₂培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养60 min。

6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×10⁵个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO₂培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO₂培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养30 min。

5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

常见问题Q&A

Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针，哪种方法比较好？

A1: 都可以。

先加Liperfluo再加药

用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

（1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。

（3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

（6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

先加药再加Liperfluo

（1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

（4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。

其他的改善方法：

(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。

(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。

Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？

A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。

Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？

A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。

(溶解后请务必用铝箔等遮光)。

荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。

因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。

1.增强激发光的强度。

2.延长曝光时间。

Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞

A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。

有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。

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