维生素C：大航海时代的荣耀

大航海时代是西方的人到世界各处淘金的时代，小船和大海之间里辨不清情结，割舍不断的爱恋。在这你恬静，我欣喜；你愤怒我忐忑的年代中，在船上工作的船员们受到了各种厄难的威胁，这里我们来聊聊病魔主宰之坏血病的兴衰吧。

曾经叱咤大海，威震时代的一代霸主–坏血病也难以逃脱被治的厄运。

那什么是坏血病呢？

这是百科解释：维生素C缺乏后数月，患者感倦怠、全身乏力、精神抑郁、多疑、虚弱、厌食、营养不良、面色苍白、轻度贫血、牙龈肿胀、出血，并可因牙龈及齿槽坏死而致牙齿松动、脱落，骨关节肌肉疼痛，皮肤瘀点、瘀斑，毛囊过度角化、周围出血，小儿可因骨膜下出血而致下肢假性瘫痪、肿胀、压痛明显，髋关节外展，膝关节半屈，足外旋，蛙样姿势。

那又是谁有如此能耐，或者哪位神仙给咱们大航海时代船员出的这口恶气呢？

维C教主（A8100–Jinpanbio），一个在瓜果蔬中举足轻重的人物，在大航海时代中果断出手，力遏狂魔，成就一代英雄美名，开启了维C荣耀时代。在生灵涂炭的大航海路上，降下救世甘霖，所谓枯木逢春万花放，地狱净空终成佛。

所以在大航海路上，定期拜访维C教主就可以躲避灾祸，击退病魔主宰（定期的摄入新鲜的水果和蔬菜）。为了荣耀，教主主动牺牲自我，成为大航海路上生命的护道者。

病魔主宰兴—因为你的沉默；病魔主宰的衰–因为你的不沉默。维C教主，生命的继续是你的荣耀，而你是大航海时代的荣耀。

生化试剂柠檬酸钠的具体作用有哪些

柠檬酸钠是一种有机化合物，又名枸橼酸钠。易溶于水、可溶于甘油、难溶于醇类及其他有机溶剂，过热分解，在潮湿的环境中微有潮解，在热空气中微有风化，其溶液 pH 值约为8。檬酸钠在食品、饮料工业中用作酸度调节剂、风味剂、稳定剂；在医药工业中用作抗血凝剂、化痰药和利尿药；在洗涤剂工业中，可替代三聚磷酸钠作为无毒洗涤剂的助剂；还用于酿造、注射液、摄影药品和电镀等。

柠檬酸钠的作用：

柠檬酸钠用途广泛，在食品、医药、洗涤剂等方面都有用到，用于酿造、注射液、摄影药品和电镀等。

柠檬酸钠是目前最重要的柠檬酸盐，主要由淀粉类物质经发酵生成柠檬酸，再跟碱类物质中和而产生，柠檬汁中含有大量柠檬酸，柠檬酸与钙离子结合则成可溶性络合物，能缓解钙离子促使血液凝固的作用，可预防和治疗高血压和心肌梗死。所以可以起抗凝血作用。 在临床上采取新鲜血液时,需要加入一些消毒过的柠檬酸钠或草酸钠,就能起到防止血液凝固的作用,所以柠檬酸钠和草酸钠被称为抗凝血剂。柠檬酸钠具有水溶性好、对水中的Ca2+、Mg2+等金属离子具有优良的螯合能力、能发生生物降解、分散能力及抗再沉积能力强等特点，因此正逐渐成为三聚磷酸钠的替代品，被用来生产无磷洗衣粉，尤其是无磷液体洗涤剂。洗涤剂中加入一定量的柠檬酸钠，能明显增加洗涤剂的去污能力。

在生物行业，柠檬酸钠也是常用的缓冲液之一，柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L， pH6.0是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

常见的指示剂有哪些

不同的指示剂在不同的酸碱环境下呈现不同的颜色。

指示剂的分类

1、酸碱指示剂。指示溶液中H+浓度的变化，是一种有机弱酸或有机弱碱，其酸性和碱性具有不同的颜色。指示剂酸HIn在溶液中的离解常数Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的颜色决定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又决定于[H+]。以甲基橙（Ka=10-3.4）为例，溶液的pH<3.1时，呈酸性，具红色；pH>4.4时，呈碱性，具黄色；而在pH3.1～4.4，则出现红黄的混合色橙色，称之为指示剂的变色范围。不同的酸碱指示剂有不同的变色范围。

2、金属指示剂。络合滴定法所用的指示剂，大多是染料，它在一定pH下能与金属离子络合呈现一种与游离指示剂完全不同的颜色而指示终点。

3、杨Hau还原至实际。为氧化剂或还原剂，它的氧化形与还原形具有不同的颜色，在滴定中被氧化（或还原）时，即变色，指示出溶液电位的变化。

4、沉淀滴定指示剂。主要是Ag+与卤素离子的滴定，以络酸钾、铁铵矾或荧光黄作指示剂。

常见指示剂的变色范围

石蕊                变色范围       PH5.8——8.0         由红色变为蓝色

甲基橙              变色范围       PH3.1——4.4         由红色变为黄色

酚酞                变色范围       PH8.2——10.0        由无色变为红色

甲基红              变色范围       PH4.4——6.2         由红色变为黄色

溴百里酚蓝          变色范围       PH6.2——7.6         由黄色变为蓝色

用以指示滴定终点的试剂。在各类滴定过程中，随着滴定剂的加入，被滴定物质和滴定剂的浓度都在不断变化，在等当点附近，离子浓度会发生较大变化，能够对这种离子浓度变化作出显示（如改变溶液颜色，生成沉淀等）的试剂就叫指示剂。

WS琼脂-培养基配方

WS琼脂是上海金畔生物科技有限公司公司改良的培养基，产品符合中国药典，提供WS琼脂用途，原理，用法，配方，以及质量控制等信息。
原理：月示蛋白胨、牛肉膏提供碳源、氮源、维生素和矿物质；氯化钠维持均衡的渗透压；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；十二烷基硫酸钠、溴麝香草酚兰和酸性复红抑制革兰氏阳性菌；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。
用途：用于沙门氏菌的选择性分离（GB标准）
用法：称取本品65.76g,加热煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,倾入无菌平皿。无需高压灭菌
质量控制：

在36±1℃培养18-24小时。

配方：

IPTG诱导蛋白表达步骤说明

异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。

材料

1、诱导表达材料

( 1 ) LB （Luria—Bertani）)培养基酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g

NaCl 10g 琼脂 (Agar) 1-2%

蒸馏水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0

适用范围：大肠杆菌

( 2 ) IPTG 贮备液：2 g IPTG溶于10 mL 蒸馏水中，0 . 22 μm 滤膜过滤除菌，分装成1 mL /份，－20 ℃ 保存。

( 3 ) l× 凝胶电泳加样缓冲液：

50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )

50 mmol / L DTT

2 % SDS （电泳级）

0.1 ％ 溴酚蓝

10 ％ 甘油

2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料

1 ）酶溶法

（1）裂解缓冲液：

50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )

1 mmol / L EDTA

100 mmol / LNaCI

（2）50 mmol / L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）。

（3）10 mg / mL 溶菌酶。

（4）脱氧胆酸。

（5）1 mg / mL DNase I。2 ）超声破碎法

( 1 ) TE 缓冲液。

( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液：

100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 )

100 mmol / L DTT

4 %SDS

0.2 ％ 溴酚蓝

20 ％ 甘油

实验方案

1、外源基因的诱导表达

( 1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。

( 2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。

( 3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定确定无误后进行下一步。

( 4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动子，则在30 -32 ℃ 培养数小时，使培养液的OD600达0.4-0.6 ，迅速使温度升至42 ℃ 继续培养3 -5h ；如果表达载体的原核启动子为tac 等，则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L。继续培养3 -5h 。

( 5 ）取上述培养液1 mL , 1000g 离心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS -PAGE 检测。

2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化

1 ）细菌的裂解

常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③ 超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用，后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。

（1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；壳多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用，而其他几种酶对酵母作用显著。

主要步骤为：

① 4 ℃ ，5000rpm 离心，15 min ，收集诱导表达的细菌培养液（100 mL ）。弃上清，约每克湿菌加3 mL 裂解缓冲液，悬浮沉淀。

注意事项：培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培养基4℃避光保存，须在1~2 周内使用。

保存：IPTG要2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室温可放置一个月。远离热源及氧化剂。