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Induro™ 反转录酶 收藏
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产品特性
• 反转录延伸能力强，可快速获得大量长片段 cDNA
产品描述
体验新型反转录酶，感受II 型内含子编码的反转录酶带来的超强反转录活性
Induro 反转录酶是由 II 型内含子编码的反转录酶，在 RNA 反转录合成 cDNA 过程中，展示出更强持续合成能力、热稳定性，以及抑制剂耐受能力。特别适用于长转录本、复杂二级结构，以及含有抑制成分的 RNA 样品反转录合成 cDNA。Induro 反转录酶提升了长转录本的 5′ 端测序覆盖度，因此适用于 RNA-seq 应用，例如：RNA 直接测序、长片段 cDNA 测序。
图 1：Induro 反转录酶的持续合成能力强，能够快速高效合成 cDNA
Induro 反转录酶能够在 55℃ 条件下，5 分钟内合成 12 kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb)，验证全长 cDNA 反转录效果。验证全长 cDNA 的合成效果。首先，合成第一链 cDNA，随后，用 NaOH 水解 RNA 链，然后，将 cDNA 产物等分，分别加入 5´ 特异性引物合成全长双链 cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链 cDNA 产物进行检测。
图 2：Induro 反转录酶热稳定性能卓越，能够在更高反应温度下稳定合成
Induro 反转录酶能够在 45°C-60°C条件下，10 分钟内合成 12 kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb)，验证全长 cDNA 的合成效果。首先，合成第一链 cDNA，随后，用 NaOH 水解 RNA 链，然后，将 cDNA 产物等分，分别加入 5´ 特异性引物合成全长双链 cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链 cDNA 产物进行检测。。
图 3：Induro 反转录酶合成长片段 cDNA 时，产量最高
转录本长度 ≥8 kb 时，Induro 反转录酶合成的 cDNA 产量最高。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb) 。首先，合成第一链 cDNA，随后，水解 RNA 链，加入 5´ 特异性引物合成第二链 cDNA
图 4：Induro 反转录酶能够以复杂的人 RNA 为模板，反转录合成长片段 cDNA
Induro 反转录酶能够以人总 RNA 为模板，分别在 50°C、55°C 或 60°C 条件下，经 10 分钟孵育，合成 >14 kb cDNA 产物。第一链 cDNA 合成后，将产物等分，使用 LongAmp® Taq 2X 预混液 (NEB #M0287) 进行 PCR。
图 5：Induro 反转录酶耐受抑制剂的能力比 TGIRT 更强
与 TGIRT®-III酶 (T) 相比，Induro 反转录酶 (I) 对 RNA 生物样品中常见的抑制成分耐受力更强。在 20 μ 反转录体系中加入 1 μg 长度为 8 kb 的 RNA 体外转录产物（含 poly A）和 oligo dT23VN。所有反应组分（包含 RT 酶）在冰上混合均匀后，加入抑制剂。Induro 的反转录条件为：55°C 10 min，95°C 1 min。TGIRT 的反转录条件为：60℃ 60 min，95℃ 1 min。图中抑制剂含量为其在第一链 cDNA 合成体系中的终浓度。之后加入 5´ 特异性引物合成第二链。