T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）

T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（NEB #M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。  

重组 E. coli 菌株，克隆有经修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。  

热失活：65℃ 加热 20 分钟。  

达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。 

放射性标记反应：50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。

CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。

DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（w/v）的 PEG-8,000。

T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。

一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。 

T4 多聚核苷酸激酶和 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [³²P] 掺入所需要的酶量（1）。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

10,000 units/ml。  

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。