Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶 货 号 #M0467L-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶                              收藏

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0467L
100,000 units
3,139.00

#M0467S
20,000 units
779.00

Download:       

  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

特性

  • Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶,与 T4 DNA 连接酶相比提高了耐盐性
  • 不仅能够连接平末端和粘性末端,还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
  • 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液

概述

 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶作为 T4 DNA 连接酶的耐盐变体,该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的5´ -磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键,比野生型T4 DNA连接酶更耐受高盐条件。该酶在盐浓度高达300mM的情况下仍能连接粘性末端而不丧失任何活性。该酶对其他反应组分(载体或插入片段)携带的盐不敏感,并允许连接反应在盐含量较高的替代反应缓冲液(如 NEBuffer 3.1)中进行。

 

图1:与T4 DNA连接酶相比,Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶在粘性末端底物上表现出更高的耐盐性

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L

 

在 25℃ 条件下,用 400 单位的 T4 DNA 连接酶(NEB # M0202)或 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶(NEB #   M0467)与 0.12 µM 荧光标记的 HindIII(粘性末端)酶切片段在盐量增加(0-1000 mM NaCl)的 1 x T4
DNA 连接酶缓冲液中温育 10 分钟。连接产物用毛细管电泳检测。

 

当盐浓度超过 200 mM 时,T4 DNA连接酶的活性迅速丧失,而在盐浓度高达 500 mM时,Salt-T4 耐盐
DNA 连接酶在粘性末端底物上仍保留了 > 60% 的活性。

来源
纯化自表达 Salt- T4 耐盐 DNA连接酶基因的 E. coli
 
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP,(pH 7.5 @ 25℃)) ,25℃ 温育。
 
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
 
质保声明
Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指在 20 µl 反应体系中,含 100 mM NaCl 的 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液条件下,25℃ 温育 30 分钟,能使 50% 的 6 µg 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。
 
浓度
400,000 units/ml。
 
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 T4 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001S)稀释,
-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、室温连接
为了方便,可在室温(20-25℃)进行连接。连接粘性末端(1 x T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶,反应 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端
(1 x StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶,反应 10 分钟。不要用加热来终止反应,因为 StickTogetherDNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
 
参考文献
该产品的特性和应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。