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E.coli JM109 Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9022	E.coli JM109 Electro-Cells	50 μl × 10	￥1,013

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■ 制品内容 E.coli JM109 Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 由于E. coli JM109 Electro-Cells含有F' 质粒，可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞，也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时，重组体可以利用电转化细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi -1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ (lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZ ΔM15]

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

转入10 pg 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 cfu/μg pUC19

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。

3. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。

6. 稀释时，使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。

7. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water     Tryptone 0.8 g     Yeast extract 0.5 g     NaCl 0.5 g       用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为0.6%，高压灭菌。 8. 制备感受态细胞。当DNA插入M13噬菌体载体克隆位点时，重组体可通过在YT-soft agar添加X-Gal 和IPTG进行筛选，因为非重组体存在于蓝斑中。 9. YT-plate: Ingredient per liter water     Tryptone 8 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为1.5%，高压灭菌。

10. 当加入X-Gal或IPTG时，按照以下方法操作：

·加入100 mM IPTG，100 μl-300μl IPTG/100 ml agar medium 和 25 μl IPTG /3 ml soft agar。

·加入20 mg/ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）到agar medium中，比例为200 μl-300 μl /100 ml。若使用 soft agar，比例为50 μl/3 ml。

11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。