TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit
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Takara RR176 TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit 50 Rxns ¥801 TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit
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■ 制品内容 (50 次量)
PCR Premix* 500 μl × 3 支
PCR primers:  
      Forward primer (20 pmol/μl) 30 μl × 1 支
      Reverse primer1 (20 pmol/μl) 30 μl × 1 支
      Reverse primer2 (20 pmol/μl) 30 μl × 1 支
Seq primers:  
      Seq forward (10 pmol/μl) 20 μl × 1 支
      Seq internal (10 pmol/μl) 20 μl × 1 支
      Seq reverse (10 pmol/μl) 20 μl × 1 支
Positive Control DNA (1 ng/μl ) 10 μl × 1 支
16S-free H2O 1 ml × 3 支
   
* PCR Premix中含有TaKaRa Ex Taq、反应用Buffer、dNTP Mixture等,应尽量避免反复冻融。
 
 
■ 制品说明
本试剂盒是PCR扩增细菌16S rDNA的试剂盒,通过进一步对PCR扩增的DNA片段进行序列分析,可以鉴定被检测细菌的种类。细菌的rRNA是细胞内含量最多的RNA,约占RNA总量的80%以上,其分子量大,种类多,由高度保守区和可变区组成。细菌的rRNA包括5S、16S、23S,其中5S rRNA信息量少,不适合分析。23S rRNA尽管分子大,信息量多,但碱基突变速度较快,同样不适用于细菌鉴定。相比之下16S rRNA的遗传较为稳定,长度在1,550±200 bp左右,代表信息量适中,是研究系统进化的好材料。目前已经报道了10,000种以上的细菌16S rDNA序列。通过对16S rDNA的序列分析,可以将细菌划分到属或种。
16S rDNA可以通过PCR法扩增获得,由于16S rDNA的两端较为保守,可以在这段保守区域设计引物,扩增鉴定细菌的16S rRNA基因,然后进行DNA测序,再将其DNA序列与GenBank中的已知序列进行同源性比较后,可以判定检测细菌的种类。
本试剂盒中包含了进行细菌16S rDNA PCR扩增的所有试剂,同时还提供了三条测序用引物(正向测序引物Seq forward、反向测序引物Seq reverse、中间测序引物Seq internal)。PCR扩增引物可以扩增细菌16S rDNA前500 bp的DNA片段(Forward primer/ Reverse primer1),以及全序列的DNA片段(Forward primer/ Reverse primer2)。16S rDNA的前500 bp 序列变化较大,包含有丰富的细菌种属的特异性信息,进行DNA测序时一个测序反应即可测通,是一种较为经济便捷的16S rDNA鉴定方法;如果前500 bp序列不足以反映细菌的种属信息时,则可以进行16S rDNA的全序列PCR扩增及DNA测序,得到较为全面的16S rDNA序列信息。
对于难以培养、生化反应不明显及传统表型方法不能鉴定的细菌,使用本试剂盒鉴定未知细菌种类尤为方便。
 
■ 保存
-20℃保存,使用时请于冰中融化。
 
■ 注意事项
1. 操作注意。
① 本实验所使用的试剂极易污染,实验尽可能在超净工作台中进行。
② 实验人员应穿无细菌污染的实验服,戴口罩和手套,预先用70%乙醇对实验器具进行消毒等。
③ 实验应使用专用的仪器和耗材,例如:专用的微量移液器及配套的枪头。开启Microtube要小心,防止污染等。
2. PCR Premix 的使用方法。
   PCR Premix中含有TaKaRa Ex Taq,应尽量避免反复冻融。
3. 实验用细菌应为纯菌,以确保实验的可信度。