组胺测定试剂盒

显色法测定组胺

　　对于以生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）为原料的食品来说，为了防止组胺过量而导致过敏性中毒，对于食品组胺浓度测定的管理是很重要的。

　　但是，以前的组胺检测需要耗时一天，检测费用高，需要使用大型检测设备。如果用显色法组胺检测系统，生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）的组胺含量检测可以快捷地完成。

获奖履历：

　　2007年平成19年度日本水产学会水产技术奖

　　2014年平成26年度日本酱油协会日本酱油技术奖

◆特点

　　●　简单  由于酶的特异性高，无需使用强酸或有机溶剂，任何对象均可简单、安全地分析

　　●　迅速  如果是生鱼，检测和提取过程仅需要1个小时即可得到结果。

　　●　廉价  用廉价的试剂和检测器就可检测，免除了仪器成本。

◆测定原理

◆性能

　　●　特异性：即使样本中含有尸胺和腐胺等其他的胺类也不影响检测结果。

　　●　测定范围：0.4-6ppm生鱼样本换算10-150ppm（稀释25倍）。

　　●　测定时间：各试剂注入后约20分钟。

◆试剂盒组成

（60次测定：10次*6）（2-8℃保存）

注意：

　　●　测定时推荐分光光度计（在470nm处左右检测）

　　●　此试剂除了自主卫生检查和研究用途以外不可使用。

◆测定方法

　　●　下文所示显色法测定组胺实验手册

　　●　生鱼（分光光度计测定）

◆显色法测定组胺实验手册

实验器具准备

　　●　分光光度计

　　●　微量吸管

　　●　移液器（分注0.5mL溶液）

　　●　测量吸管

　　●　秒表

　　●　塑料试管2钟（容量约50mL、10mL）

　　●　试管架

　　●　水浴锅（设置到37℃）

　　●　遮光用的锡箔纸和箱子

　　●　天平（可测定1g类型）

　　●　粉碎机（研钵、匀浆器等）

　　●　漏斗

　　●　滤纸

　　●　旋涡混合器

　　●　冰浴装置

　　●　药匙

　　注意：因为组胺易吸附在玻璃上，试管等请使用塑料材质。

实验试剂准备

　　1、蒸馏水或者去离子水

　　2、0.1M EDTA·钠水溶液（pH=8）：提取用溶液（将市售的0.5M EDTA溶液（pH=8）制备成5倍稀释液，可作为提取用溶液使用。）称取EDTA二钠二水合物37.2克，倒入1L容器。加入约750mL蒸馏水。搅拌混匀。用氢氧.化钾水溶液或者氢氧.化钠水溶液调节pH值到8.0。pH值是在搅拌停止时的状态测定。将配置好的溶液倒入1L量筒，用蒸馏水定容到1L。制备完毕后倒入新容器，在室温下保存。

操作流程

1.检测液的配制

　　①称取样本（生鱼）约10g置于粉碎机制成样本粉末。

　　②称量1g样本装入塑料试管（50mL容量）。

　　③向试管中加入24mL提取用溶液，用漩涡混合器使其拌匀。

　　④将试管置于沸水中20分钟，加入提取。

　　⑤将试管置于冰上冷却后，清理样本碎块，用漩涡混合器使其拌匀。

　　⑥用滤纸（No.5C）过滤步骤⑤的提取液。

　　⑦抽取滤液1mL以上作为检测液。

2.试剂的准备

　　①显色试剂（紫色标签）用11mL蒸馏水溶解。

　　②酶试剂（绿色标签）用6mL缓冲液（粉红色标签）溶解。

3.测定

　　①准备4个塑料试管，如下表所示加入各个试剂。

　　（1次测定情况）同一样本3次测定的情况：（样本，空白样本，标准液，显色对照）*3=12

　　②遮光处理，37℃孵育15分钟，然后用分光光度计测定各反应液的吸光度。

　　Es：检测液的吸光度  Eb：检测液空白的吸光度 Estd：标准液的吸光度 Ec：发光对照的吸光度

组胺浓度的计算方法

计算式：

　　样本液中的组胺含量（mg/L=ppm）=(Es-Eb)/（Estd-Ec）*4※1*25※2

　　样本液中的组胺含量（mg/L=ppm）=(Es-Eb)/（Estd-Ec）*100

　　※1  4：标准液的组胺浓度      ※2  25：样本溶液稀释25倍