蛋白提取试剂-分子生物实验

蛋白提取试剂

北京上海金畔生物科技有限公司公司提供蛋白提取试剂,生物实验中对于蛋白研究,蛋白的来源通常分为细菌来源和组织或者细胞来源。
1细菌蛋白提取:
如果是细菌来源蛋白提取,通常将细菌用蒸馏水溶解,然后直接超声波破碎就裂解了,只要菌液不是太浓,可以用超声波破碎的很清亮,低速离心取上清,即为细菌总蛋白,然后进行后续研究。
2,动物组织细胞蛋白提取:
北京上海金畔生物科技有限公司公司提供高效RIPA组织/细胞裂解液适用于动物组织细胞蛋白提取(货号:R0010)
规格:20ml/100ml
本产品配有一支PMSF(0.3ml/1.5ml)
保存:RIPA裂解液4℃保存,PMSF-20 ℃保存。
北京上海金畔生物科技有限公司公司蛋白提取使用说明:
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每1ml RIPA加入10ul PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用(PMSF现用现加)。
1、样品前处理: 
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
注意事项:
本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
3.植物蛋白提取试剂盒
4.全蛋白提取试剂盒

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