RNase的特异性抑制剂-RNase阻抑蛋白(RNasin)-技术文章

RNase的特异性抑制剂-RNase阻抑蛋白(RNasin)

RNA酶,尤其是胰RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶类。除细胞内RNase以外,环境中灰尘、各种试验器皿和试剂、人体的汗液、以及唾液中军存在RNase。这类酶耐热、耐酸、耐碱,煮沸也不能使之完全失活,蛋白质变性剂可使之暂时失活,但变性剂去除后,又可恢复活性。RNase的活性不需要辅助因子,二价金属离子螯合剂对它的活性无任何影响,故在提取RNA时  ,应尽量减少RNA酶对RNA的降解作用。

RNasin是一类从大鼠肝或人胎盘中提取出来的酸性糖蛋白质,鼠肝RNasin分子量为40KD;来源于人胎盘的RNasin分子量为51KD,等电点为4.7,最适pH为7~8。RNasin能与RNase非共价结合(Ki=3×1010)从而抑制了它们的活力,RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂。1mmol/L的二巯基乙醇对于RNasin的发挥抑制RNase的最大活性非常重要。RNasin最好不要与某些蛋白质变性剂(如7mol/L的尿素)同时使用,因为尿素能使RNase-RNasin复合物分离,并释放出活性的RNase。

RNasin贮存于50%甘油或5mmol/L二巯基乙醇溶液中,-20度保存,反复冻融或者贮存在有氧化剂的溶液中,RNasin极易被破环,不宜继续使用。RNasin对其他核酸工具酶无影响,对RNase有强的特异性抑制效果,很容易被酚抽提除去,故日益被广泛应用。常用于体外翻译系统、mRNA反转录合成CDNA以及体外转录实验。

上海金畔生物科技有限公司RNA酶抑制剂是从人胎盘中提取的一种光谱核糖核酸酶抑制剂,分子量约50KD。储存液的组成为:20mM Hepes-KOH,pH 7.6;50mm KCL;8mM DTT和50%甘油。浓度为:40U/l。

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