革兰氏染色液的原理和方法

革兰氏染色主要用来区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。先来介绍一下这个实验原理：

因为革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖网层较厚且交联致密，没有类脂存在，而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，肽聚糖网层薄且交联较差，外膜上存在较多的类脂。两者的这些区别造成了在进行革兰氏染色后出现不同染色结果。

革兰氏阳性菌：当结晶紫染液和碘液相遇后，形成不溶性的有色复合物，当用乙醇脱色时，因为胞体的失水，而使得肽聚糖交联更加紧密，网孔缩小，把紫色复合物截留在细胞内，从而使细胞呈现紫色；而革兰氏阴性菌与乙醇脱色时，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能截留形成的紫色复合物，所以呈现无色，再经沙黄复染后呈现红色。

革兰氏染色方法：

1、涂片：利用移液枪吸取10ul的菌液滴在载玻片，用烧红的涂菌棒涂抹均匀，面积适中。

2、干燥与固定：将载玻片放置在酒精灯火焰上方一定距离处，涂菌面向上，将菌液烤干，温度不宜过高，炙烤不宜时间太长，固定就是将涂菌面向上，载玻片快速在火焰中过2-3次。

3、初染：在菌液面上滴加1-2滴草酸铵结晶紫，染色1min

4、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。

5、媒染：吸取300ul碘液滴在样本上，染色1min。

6、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。

7、脱色：倾斜玻片，滴加95%的乙醇，约30s，再水洗一次。

8、复染：在样本上滴加沙黄染液1-2滴，染色1min。

9、水洗：在小股水流下冲洗，直至流过玻片的水无色为止。

10、干燥与观察：用纸擦去水，干燥后在显微镜下观察，菌体呈现紫色的是革兰氏阳性菌，呈现红色的是革兰氏阴性菌。