上海金畔生物科技有限公司钙黄绿素染色步骤说明

钙黄绿素（Calcein）用于络合指示剂荧光指示剂等领域。其钠盐为橙红色结晶，溶于水，呈黄色而有绿色荧光，不溶于无水乙醇和乙醚。以下为钙黄绿素染色步骤，仅供参考。

钙黄绿素染色步骤

1、用DMSO制备1 mM 的钙黄绿素溶液，并用PBS将其稀释制成1～50 μM的钙黄绿素溶液。

2、将1/10细胞培养基体积的钙黄绿素溶液加入到细胞培养基中。

3、在37℃培养细胞15-30分钟。

4、用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

5、用490 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a、如果钙黄绿素溶液很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如Pluronic F127。

b、或者您也可以用1/10浓度的Calcein-AM溶液代替培养基。

钙黄绿素，Calcein另外在核酸扩增过程中会形成大量的焦磷酸根离子。荧光染料中的锰离子与钙黄绿素结合导致荧光淬灭，同时染料颜色为橙色。当扩增反应形成焦磷酸根离子时，锰离子与焦磷酸根离子结合形成焦磷酸锰，引起荧光信号的产生，同时染料颜色变为黄绿色。钙黄绿素目前已广泛应用于恒温扩增反应的荧光检测。