葡聚糖凝胶使用说明

产品简介

葡聚糖凝胶（Sephadex）是白色珠状颗粒，由葡聚糖经醚键相互交联聚合而成具有多孔性三度空间网状结构的高分子分离材料，为稳定的亲水性凝胶，在水中和电解质中很容易溶胀。不同型号的葡聚糖用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的数字除以10为该凝胶每克干重所吸收水的毫升数。能使一定分子范围的大分子进入凝胶的网状结构内。溶胀程度不同，分离分级范围也不同。具体产品的分离范围及应用如下：

产品名称           分离范围             应用

葡聚糖G-10       <700                 缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除下分子

葡聚糖G-15       <1500               缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除下分子

葡聚糖G-25       1000-5000         工业上脱盐及交换缓冲液

葡聚糖G-50       1000-30000       多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定

葡聚糖G-75       2000-70000       蛋白分离纯化、分子量测定，平衡常数测定

葡聚糖G-100     2000-120000     蛋白分离纯化、分子量测定，平衡常数测定

葡聚糖G-150     5000-300000     蛋白分离纯化、分子量测定，平衡常数测定

葡聚糖G-200     5000-600000     蛋白分离纯化、分子量测定，平衡常数测定

产品性质

化学稳定性：葡聚糖那不溶于一切溶剂（除非它被水解），在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都有很好的稳定性，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂容易破坏凝胶，所以应该避免使用。在湿空气中易长霉，可用氯仿、甲苯、叠氮钠做防腐剂。

物理稳定性：葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性pH进行灭菌或者高压灭菌120°C，30分钟不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120°C以上开始焦糖化。

产品用途

利用分子筛作用，主要用于除盐、多肽分离、清洗生物提取液，分子量的测定。

使用方法

1.凝胶预溶胀

在凝胶使用前，首先将其溶胀，具体方法：室温下，将干粉浸泡在超纯水中充分溶胀24小时，并不断搅拌保证凝胶 充分溶胀；或者在室温下，将干粉浸泡在50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶完全溶胀，用超纯水洗去乙醇；

2.装柱

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性注入柱内，注意要避免柱内产生气泡或者断层，保持湿态装柱，可在凝胶可承受的操作压下装柱，保证装柱均匀，装完柱可以检测柱效，检查凝胶装填是否合格。

3.平衡

上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到基线平稳；

4.上样

凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，初次上样建议控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可

5.洗脱方法

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

6.在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

7.保存

凝胶使用完后，可将其回收，可将凝胶用超纯水冲洗干净并滤干，加入0.02%的叠氮钠做为防腐剂，或者浸泡在20%的乙醇中，防止长菌。