环氧活化-琼脂糖凝胶6B的偶联步骤级注意事项

产品简介

环氧活化-琼脂糖凝胶6B以6%琼脂糖凝胶为基质，采用环氧活化的方法激活琼脂糖上的羟基，活化后即可直接用于各种配基的偶联。可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基（蛋白质、多肽、氨基酸或糖等）的偶联。具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

产品相关参数：

产品名称：环氧活化-琼脂糖凝胶6B

货号：E8260

规格：5g

GRADE：BR

英文名称：Epoxy-activated Sepharose 6B?

其他名称：Epoxy活化琼脂糖凝胶6B

基质：6%高度交联琼脂糖凝胶

功能基团：epoxy

配基密度：20-40μmoles/mL drained matrix

平均粒径：90μm

最大流速：300cm/h

偶联条件：pH8-10,温度 4-45°C,时间1-16小时，可在水相和有机相中偶联

用途：亲和层析介质

性状：白色胶体；

储存温度：4-8°C

偶联步骤

该环氧活化琼脂糖凝胶介质可以和含有氨基、巯基或羟基的亲和配基的蛋白质、多肽、糖等物质偶联。具体的偶联方法如下（偶联BSA为例）：

洗涤：用10-20倍胶体积的去离子水冲洗保存存储液中的环氧活化胶，除去存储液，抽干；

偶联：称取200mg BSA，溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸钠缓冲液，加入到洗涤抽干的活化胶中，在37℃摇床上振荡12-24h偶联，偶联完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干；

封闭：将抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中，加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。搅拌速度120 rpm，37 ℃条件下反应4h，然后将料液转移到砂芯漏斗中抽干。

清洗：然后依次用5倍的去离子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤后，抽干。

保存：保存于4℃、20%乙醇溶液中。

注意事项：

1.不同配基的偶联方法与上面类似，但是反应的条件例如：配基加入量，反应时间，反应温度应根据配基的不同进行适当的调整； 

2.可用碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液做为偶联缓冲液，但绝对不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的缓冲液。