BSA封闭液配制方法说明-技术文章

BSA封闭液配制方法说明

    BSA封闭液是由牛血清白蛋白配制而成,在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。

20%BSA封闭液配制方法

    在无菌条件下,称取20.00克牛血清白蛋白(BSA),用DMEM培养基溶液溶解后定容到100毫升,调pH值至7.4后用0.45 um滤膜过滤除菌(较难过滤),最后放入4℃冰箱保存。

有关BSA封闭液的相关问题:

    1、请问BSA封闭液怎样灭菌,用过滤膜应该买哪种孔径,什么型号的过滤膜?

    用0。22UM的。。PVDF材质的滤膜应该好点。这种膜对蛋白的吸附小点。

    2、想做细菌的分泌蛋白。但培养基里有10mg/ml的BSA。收集培养上清后,不知道有什么方法可以去除BSA。

    直接过柱子,吸附的是BSA,别的穿透,但是样品需要没盐或者盐浓度不能太高,降低ph到4-5可以提高效率.

    3、免疫组化时,可以用1%BSA-PBS来稀释一抗,不知该怎样配制,谁试过,是否可降低背景染色?

    就是用PBS液来稀释BSA, 100mlPBS中加1gBSA. 一般情况下,可以提高适当BSA的浓度,这样的确可以减少非特异性吸附,从而降低背景染色. 也可以在稀释液中加入其他的惰性蛋白,关键是要调节好一抗的浓度。

    牛血清白蛋白就是我们常说的BSA,牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别,它不是一定的,是多聚物,有的地方测的70 000,这就是一个数据了。在做PCR的时候会用到它。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

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