上海金畔生物科技有限公司AEC染色试剂盒工作液的配制及注意事项

产品简介：
    AEC底物显色试剂盒是一种可以通过过氧化物酶催化底物3－氨基－9－乙基咔唑氧化形成红色不溶性产物，以此鉴定过氧化物酶活性，从而确定目标分子表达情况，该种方法权威而经典。其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测（蛋白质免疫印记、免疫组织化学、以及原位杂交染色等）。产品性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。
    3－氨基－9－乙基咔唑（3-amino－9－ethylcarbazole；AEC）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，其分子式为C14H14N2，分子量为210.3。在过氧化物酶的催化下，电子供体AEC底物在过氧化氢氧化下，失去电子而呈现出颜色变化和沉积，形成稳定性红色不溶性产物（能溶于有机试剂）。
使用说明：
    1．工作液配制：
    取850ul无菌双蒸水，依次加入50ul溶液A、50 ul溶液B、50ul溶液C、混合均匀，即配成AEC工作液。如需要更大体积工作液，可按相应比例放大。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，半小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。
    2．显色：
    1）蛋白质印迹膜显色：将配制好的工作液滴加在印迹膜上（或将印迹膜浸入AEC工作液中），显色时间一般为10-30min。显色完毕后，将膜浸入蒸馏水中，终止反应。
    2）组织切片染色：向组织切片上加入适量AEC工作液，确保能充分覆盖样品。室温孵育10-30 min，避免光照，直至显色至预期深浅。可在显微镜下观察控制显色时间。显色后用蒸馏水洗涤即可终止显色反应。
    3）对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：
    1.由于AEC生成的颜色产物为脂溶性，因此用于IHC显色后不适合用中性树脂封片，须用水性封片剂封片也正因为如此，可以在显色后进行多重染色技术。
    2.根据情况自行优化实验条件，调整显色时间，获得最佳显色效果。
    3.AEC有一定毒性，操作时请采取必要的防护措施。