什么是LB培养基,以及LB培养基的的分类
什么是LB培养基?LB培养基是一种培养基的名称,是微生物学实验中最常用的培养基,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.可分为液体培养基和固体培养基。
LB培养基的分类
液态LB培养基
根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著)配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化钠(NaCl) 10g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)
固态LB培养基
LB固体培养基1L和液体一样,加10g~15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
LB培养基的配制:
成分
胰蛋白胨(tryptone) 10g
酵母提取物(yeast extract) 5g
氯化钠(NaCl) 10g
固体培养基另加 琼脂粉 15-20g
加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH至7.2,121℃灭菌30min
配制方法
(1)称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于烧杯中。
(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中,用玻棒搅拌,使药品全部溶化。
(3)调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
(4)定容 将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
(5)加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
以上便是LB培养基的简单介绍以及分类和配制方法。LB培养基由蛋白胨、酵母膏、nacl组成。首先,蛋白胨是经过胰酶处理过的蛋白,处理后,大分子的蛋白分子量变小,细菌更容易利用。此外,还含有嘌呤,提供生长因子。如要培养大肠杆菌,其实用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是没有问题的。