RIPA裂解液的配制方法详细说明
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液,主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。可分为强效RIPA裂解液和普通RIPA裂解液,其RIPA裂解液的配制方法也有所不同。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA裂解液的配制方法
NP-40orTriton-1001%
TrisHCl(pH8.0)50mmol/L
NaCl150mmol/L
PMSF(苯甲基磺酰氟)0.1mmol/L(100μg/ml)
Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂)1μmol/L(0.7μg/ml)
Leupeptin(亮抑制肽)0.5mg/ml
Aprotinin(抑蛋白酶肽)0.3μmol/L(1μg/ml)
(注:PMSF贮存液:100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中;
Aprotinin贮存液:10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);
Leupeptin贮存液:10mg/ml溶于水中;
Pepstatin贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存)
RIPA裂解液的成分:
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%TritonX-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate。
RIPA裂解液的配制方法有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异。