几种SDS PAGE的配制方法

SDS PAGE又称聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语： polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE） 作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。

SDS PAGE的配制方法

将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。

10%（W/V, g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（100 ml）

1. 称取10g过硫酸铵；

2. 加入100 ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；

3. 贮存于4℃。

注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1 L）

1. 称取Tris粉末15.1 g、Glycine（甘氨酸）94 g、SDS 5.0 g；

2. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解；

3. 加去离子水定容至1 L，室温保存。

注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案一）：（5 ml）

（本方案摘自Takara网站）

组分：Tris-HCl? pH6.8（250 mM）；SDS （10%）；溴酚兰（0.5%）；甘油（50%）；β-巯基乙醇（5%）

配制过程：

1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 1.25 ml；甘油2.5 ml；称取SDS固体粉末0.5 g；溴酚兰25 mg；

2. 加入去离子水溶解后定容至5 ml；

3. 小份（500 μl）分装后，于室温保存。

4. 使用前将25 μl的β-巯基乙醇加入到每小份中去。

5. 加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案二）：（10 ml）

（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）

组分：Tris-HCl? pH6.8（60 mM）；SDS （2%）；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）

配制过程：

1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚兰1 ml；

2. 加入去离子水定容至10 ml；

3. 分装；

4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。

以上两种上样Buffer的配方不太一样，你还可以参考下面这个配方

2×SDS凝胶加样缓冲液 组分（摘自《分子克隆》第三版）

Tris-HCl? pH6.8（100 mM）；SDS （4%）；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（200 mM）

不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。