如何避免RNA酶的污染

RNA的化学性质比DNA活跃得多。RNA分子上紧邻磷酸二脂键的2′羟基基团能直接被RNA酶利用来作为活性因子，从而使得RNA酶无需金属离子就能发挥活性。由于RNA酶在环境中广泛存在，特别是RNase A，结构极其稳定，不能通过高温高压灭菌失活，因而极难消除，对保持RNA样品的完整性构成极大的威胁。由于RNase A类酶依赖于活性位点处的组氨酸残基起催化作用，因此能被组氨酸烷化剂DEPC所抑制。
避免RNA酶的污染的方法：
1．塑料制品：尽可能使用无菌、一次性塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，有些厂家提供的产品已达到RNase-free，可以直接使用，再次处理容易造成二次污染，得不偿失。但原则上国产塑料制品处理后方可使用。处理方法如下： 
（1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入焦碳酸二乙酯（DEPC）使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC有致癌之嫌，须在通风柜中小心操作。 
（2）将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 
（3）在通风柜中37℃或室温下处理过夜。 
（4）将EDPC水溶液小心倒入废液瓶中，用铝箔封住含DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。上述处理可以除去器皿上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。 
（5）用合适的温度（80-90℃）烘烤至干燥，置于干净处备用。 
2．玻璃和金属制品： 实验室用的普通玻璃和金属器皿经常有RNA酶污染，使用前必须于180℃干烤8小时或250℃烘烤3小时以上。另一种方法是用0.1%的DEPC水溶液浸泡。 
3．电泳槽：用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3%的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1%DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿，塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA 实验专用。 
4．移液器： RNase的又一污染源是移液器。根据移液器制造商的要求对移液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的 70%乙醇擦洗移液器的内部和外部，基本达到要求。移液器金属退头器是RNA酶的一个重要来源，实验前最好取下它。 
5．溶液：用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液应用0.1% DEPC水于 37℃ 至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15 lbf/in2(1.034×105Pa)的高压下蒸气灭菌30分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因此不能用来处理含有Tris一类的缓冲液，可存几瓶新的，未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。 
6．研究人员： RNA酶广泛存在于人的皮肤上，最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离和分析RNA的材料和溶液时，以及在涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“脏的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。