IPTG配制的方法及使用说明

IPTG是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。IPTG溶液的配制很简单：在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

IPTG的使用方法：

首先把IPTG配制成24mg/ml（100mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100ml的琼脂培养基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal（20?mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100μl的Amp（100mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。

选用IPTG作诱导物的原因

能诱导酶的合成，但又不被分解的分子,称为安慰诱导物（gratuitousinducer）。?由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。X-gal（5-溴-4-录-3-吲哚-β-半乳糖苷）也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被β－半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作β－半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。

某些诱导物与自然的β-半乳糖苷酶相似，且不能?被酶分解，比如异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，（isopropylthiogalactoside,IPTG）。不被细菌分不被细菌分解性质稳定，解性质稳定，它的浓度在实验中不会改变。复杂的动力学问题，便于研究。IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被运送。半乳糖苷键中用硫代替了氧，失去了水解活性，半乳糖苷键中用硫代替了氧失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同，虽不为β-半乳糖苷酶所识的亲和力相同，IPTG虽不为半乳糖苷酶所识虽不为但它是lac基因簇十分有效的诱导物

基因簇十分有效的诱导物。但它是基因簇十分有效的诱导物。

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ 基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时。