总结实验室常用染色液的制备方法-技术文章

总结实验室常用染色液的制备方法

染色液是实验室中最常用的试剂之一,分为天然染液和人工染料,也分碱性染料和酸性染料,以下来详细介绍一下实验室常见染色液的配制。
⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ; 碘1g
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色液
配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉 ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油
(2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。
(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml
煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。
⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。
(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用)
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。
⒌ 中性红(neutral red)溶液 用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
配方:中性红 ;蒸馏水100ml
使用时再稀释10倍左右。
⒍ 曙红Y(伊红,eosin Y)酒精溶液 常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用。
配方:曙红 ; 95%酒清100ml
也常用于95%酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。
⒎ 钌红(ruthenium red)染液 钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配。
配方:钌红5~10mg ; 蒸馏水25-50ml
⒏ 龙胆紫(gentian violet) 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片。
配方:龙胆紫0.2~1 g ;蒸馏水100ml
⒐ 苯胺兰(aniline blue)溶液 为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色。
配方:苯胺兰1 g ; 35%或95%酒精100ml
⒑ 间苯三酚(phloroglucin)溶液用于测定木质素。
配方:间苯三酚5g ; 95%酒精100ml
注:此溶液呈黄褐色即失效。
⒒ 橘红G(orange G)酒精溶液 为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用。
配方:橘红G 1g ; 95%酒精100ml
⒓ 番红(safranin O)为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色。
配方:(1)番红水溶液番红0.1或1 g ;蒸馏水100ml
(2)番红酒精溶液番红0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml
(3)苯胺番红酒精染色液
甲液 番红5 g +95%酒精50ml
乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml
将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用。
⒔ 固绿(fast green)又称快绿溶液。为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间。
配方:(1)固绿酒精液固绿0.1 g ; 95%酒精100ml
(2)苯胺固绿酒精液固绿 1 g ;无水酒精 100ml ;苯胺油 4ml
配后充分摇匀,过滤后使用。现配现用效果好。
⒕ 苏木精(hematoxylin)染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色。配方很多,现举海登汉氏(Heidenhain’s)苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液。
配方:甲液(媒染剂): 硫酸铁铵(铁明矾)2-4g ;蒸馏水100ml
(必须保持新鲜,最好临用之前配制)
乙液(染色剂):苏木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸馏水 90ml
配制步骤:(1)将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存。
切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。
铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。
取亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成。
⒗詹纳斯绿B(Janus green B)染色液
将 绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。
⒘硫堇染色液
取克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应。
18.黑色素液
水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛(福尔马林)。可用作荚膜的背景染色。
19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。
20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液
A液:美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝),95%乙醇30mL;
B液:。
混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可。
21.革兰氏染色液
(1)结晶紫(cristal violet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。
(2)芦戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用。
(3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸馏水90mL。
(5)番红溶液:番红O(safranine O,又称沙黄O),95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌,前者蓝紫色,后者淡红色。
22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液;溶液100mL为B液。混合A、B液即成。
23.姬姆萨(Giemsa)染色液
(1)贮存液:称取姬姆萨粉,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用。
(2)应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。
24. 1%瑞氏(Wright’s)染色液
称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳。
以上就是一些目前实验室中常用染色液的配置方法。

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