几种TBS缓冲液配制方法介绍

TBS缓冲液是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。属于常规pH缓冲液，常用于清洗免疫染色的组织或Western?Blot?中的蛋白印迹膜等，是常用分子生物学试剂。TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)主要由Tris、氯化钠、BSA、防腐剂等组成，可用于免疫金银染色中清洗组织，亦可作为封闭液的基础试剂。
Tris缓冲盐水（TBS）：10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1N HC1调pH至7.4；
操作步骤(仅供参考)：
1、石蜡切片脱蜡至水。
2、胰蛋白酶消或3M尿素消化。
3、蒸馏水冲洗2次。
4、TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)振荡洗涤2次，每次5～10min。
5、进行封闭及下游其他实验。
一、TBS的配制
0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制：
Tris (三羟甲基胺基甲烷 )12.1g
NaCl17.5g
加蒸馏水1500ml
磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4，再加蒸馏水至2000ml，即可。
如需含1% Triton X-100，则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
二、THB的配制
A液 ( 0.2 M Tris )：( MW 121.14 ) 称取2.428克 Tris，溶于100毫升蒸馏水中。
B液 ( 0.1 N HCl)： 取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升，加入蒸馏水中，使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，补加蒸馏水至100ml。
B=X     pH     B=X     pH
45.0   7.19   25.0   8.14
42.5   7.36   22.5   8.23
41.4   7.40   20.0   8.32
40.0   7.54   17.5   8.41
38.4   7.60   15.0   8.51
37.5   7.66   12.5   8.62
35.0   7.77   10.0   8.74
32.5   7.87   7.5    8.92
30.0   7.96   5.0    9.10

27.5   8.05

免疫组织化学中，常用pH7.6的THB

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