台盼蓝染色液配制-技术文章

上海金畔生物科技有限公司台盼蓝染色液配制

台盼蓝又称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝,常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬,故可用于巨噬细胞的活体染色剂。
台盼蓝染色液的原理
细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性, 通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞,并可使用细胞计数器进行计数。
4%台盼蓝母液配制
1.称取4克台盼蓝,
2.加入少量蒸馏水研磨,
3.加0.9%NaCl至100毫升,
4.用滤纸过滤,4℃保存。或者直接用0.9%的生理盐水或者PBS配成母液用的时候用生理盐水或者PBS稀释。
台盼蓝染色法操作步骤:(仅供参考)
材料:
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管;
2. 试剂:0.4%台盼蓝染液;
3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g;
4. 生理盐水:100ml;
步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。

上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。台盼蓝染色液为上海金畔生物科技有限公司自产产品,其货号为C0040。台盼蓝为生物染色剂,如病毒检验,注入循环系统可使肾小管着色,哺乳动物、低等脊椎动物和昆虫的各种组织活体染色。

台盼蓝染色液配制-技术文章

nunc